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【摘要】 目的 探讨PDGFA在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其意义。方法 免疫组织化学染色检测甲状腺乳头状癌组织和正常的甲状腺组织中PDGFA的表达差异。结果 甲状腺乳头状癌病例组(HSCORE中位数=1.92,SEM=0.46)与正常甲状腺组(HSCORE中位数0.38,SEM=0.05)PDGFA链的表达有显著差异,P<0.05。PDGFA链在甲状腺乳头状癌病例组中较正常甲状腺组明显过度表达。甲状腺乳头状癌组阳性率68.6%,而正常甲状腺组阳性率仅为17.1%。结论 PDGFA在甲状腺乳头状癌的发病和发展中起到了一定的作用,PDGF很有希望成为甲状腺乳头状癌的一个潜在辅助诊断因子及治疗靶点。
【关键词】
血小板源性生长因子;甲状腺乳头状癌;免疫组织化学
Expression and Significance of PDGFA in Papillary Thyroid Cancer
WANG Xinzheng,CHANG Guangqi,YANG Jing.
【Abstract】 Objective To investigate the expression and significance of PDGFA in papillary thyroid cancer.Methods Immunohistochemistry was use to examinated the expression of PDGFA in papillary thyroid cancer and normal thyroid tissues.Results Protein expressions of PDGFA in disease group(median HSCORE 1.92;SEM 0.46)and in control group(median HSCORE 0.38;SEM 0.05)were significantly different(P<0.05).The expression of PDGFA protein in disease group increased significantly.Conclusion The overexpression of PDGF in PTC cell indicated that PDGF correlated intimately with PTC and involved in the formation and development of PTC.PDGF might become a potential diagnostic marker of PTC and a new target of cancer therapy.
【Key words】
Plateletderived growth factorA(PDGFA);Papillary thyroid cancer(PTC);Immunohistochemistry
DOI:10.3760/cma.j.issn 16738799.2010.01.25
作者单位:471000河南科技大学第一附属医院普外三科(王新征);
中山大学第一附属医院外三科(常光奇); 洛阳第三人民医院(杨晶)
甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)是最常见的甲状腺恶性甲状腺肿瘤。Matsuo K等发现在人甲状腺乳头状癌细胞系NPA培养过的条件培养基中有能强烈促进NIH3T3细胞系生长的物质,其促有丝分裂的活性可被血小板源性生长因子抗体部分的阻断,经鉴定为血小板源性生长因子链样的蛋白物质,而在人甲状腺滤泡状癌细胞系WRO中却没有这种物质。由此认为人甲状腺乳头状癌细胞系NPA可分泌大量血小板源性生长因子样的蛋白物质,此种物质可能对人甲状腺乳头状癌特征性乳头状结构的形成具有重要作用[1]。本实验的目的是通过免疫组化技术检测甲状腺乳头状癌组织中血小板源性生长因子A链(plateletderived growth factorA,PDGFA)蛋白的表达,初步探讨PDGF与甲状腺乳头状癌的关系。
1 材料和方法
1.1 临床资料 35例甲状腺乳头状癌组织标本取自中山大学第一附属医院2002~2006年行甲状腺癌根治术患者存档的石蜡块,其中男9例,女26例,年龄11~74岁,患者术前均未经过任何抗肿瘤治疗,术后经病理检验证实为甲状腺乳头状癌。35例正常的甲状腺组织标本取自中山大学第一附属医院2002~2006年甲状腺腺瘤或节结性甲状腺肿手术患者切除标本的存档石蜡块中相对正常的甲状腺组织,其中男6例,女29例,年龄16~73岁。
1.2 试剂及染色方法 兔抗人血小板源性生长因子A链多克隆抗体购自武汉博士德公司;二抗选用DAKO公司GK50075 EnVision两步法试剂盒。所有标本均5μm 厚连续切片。切片常规脱腊后行常规HE染色,镜下观察鉴定病变性质及部位,以确定所采用的标本的正确性。免疫组化染色检测按EnVision两步法试剂盒说明操作,用TBS液代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果分析方法 先在10×10倍光镜下观察免疫组化玻片染色结果,随机选取10个细胞分布较均匀的视野,每个视野在4×100下随机计数50个细胞。根据细胞棕黄色着色的强度按下列记分方法分为4个等级:0分=无着色,1分=轻度着色,2分=中度着色,3分=强着色,然后按公式HSCORE=Σ(i+1)Pi(这里i=1,2,3,Pi=评分为i的细胞/该例标本总观察细胞×100%)计算得到的HSCORE(histochemical score)得分[2,3]代表该张切片PDGFA链蛋白表达
的水平进行统计分析。该评分法考虑到了单个细胞是否阳性及其强弱,更具体更全面的反应细胞的蛋白表达情况。
1.4 统计学方法 用SAS8.1软件包采用Wilcoxon秩和检验比较病例组与对照组数据,以P<0.05为显著性意义的标准。
2 结果
PDGFA链主要表达于肿瘤细胞的胞浆中,在细胞膜上也有表达,而在癌旁的间质中很少表达。甲状腺乳头状癌病例组(HSCORE中位数=1.92,SEM=0.46)与对照组(HSCORE中位数0.38,SEM=0.05)PDGFA链的表达有显著差异,P<0.05。PDGFA链在甲状腺乳头状癌病例组中较对照组明显过度表达。设定HSCORE得分≥0.6分者为阳性,则病例组阳性率68.6%,而对照组阳性率仅为17.1%。
表1
病例组與对照组PDGFA阳性率及
免疫组化得分HSCORE分布情况
得分
PDGFA
病例组对照组
3~90
2~80
1~43
0.6~33
0~1127
阳性率68.6%17.1%
注:阳性率为设定HSCORE得分≥0.6分者为阳性计算结果
3 讨论
甲状腺乳头状癌的发病是一个错综复杂的过程,通过长期不断的研究人们对甲状腺乳头状癌的病因和致病因素的认识不断加深。近年来分子生物学的发展,人们逐渐认识到一些癌基因和生长因子在甲状腺乳头状癌的发病和发展中起着重要的作用。PDGF是目前人们研究较多的一种生长因子。目前国外的研究结果显示PDGF促进细胞恶性转化和肿瘤生长的作用很可能是通过肿瘤细胞中形成的PDGF的自分泌回路等机制过度激活PDGF受体介导的受体酪氨酸蛋白激酶细胞信号传导通路从而引起细胞的增殖转化[4,5]。另外越来越多的资料显示PDGF与肿瘤新生血管的形成关系密切[6,7,8]。PDGF及其受体对肿瘤组织间液高压的形成中起着重要作用,而组织间液压力(interstitial fluid pressure,IFP)较正常组织升高是许多实体性肿瘤共有的特点[9,10]。这些都提示了PDGF在多种恶性肿瘤的发生和发展中所起的重要作用,是很有前途的分子水平肿瘤治疗干预措施的靶向。但目前PDGF与甲状腺乳头状癌的关系仍不明了,我们的试验结果显示PDGFA在甲状腺乳头状癌中存在过度表达,其表达在甲状腺乳头状癌与正常甲状腺组织之间的差异明显,提示PDGFA在甲状腺乳头状癌的发病和发展中起到了一定的作用。联系到PDGF在其他多种恶性肿瘤的发生和发展中所起的重要作用,PDGF很有希望成为甲状腺乳头状癌的一个潜在辅助诊断因子及治疗靶点。
圖1 PDGFA在甲状腺乳头状癌中的阳性表达(200×)
图2 PDGFA在甲状腺乳头状癌中的阳性表达(400×)
图3 正常甲状腺组织中PDGFA的弱阳性表达(200×)
图4 正常甲状腺组织中PDGFA的弱阳性表达(200×)
参考文献
[1] Matsuo K,Tang SH,Sharifi B.Growth factor production by human thyroid carcinoma cells:abundant expression of a plateletderived growth factorBlike protein by a human papillary carcinoma cell line.J Clin Endocrinol Metab,1993,77(4):9961004.
[2] Lessey BA,Castelbaum AJ,Sawin SW,et al.Aberrant integrin expression in the endometrium of women with endometriosis.J Clin Endocrinol Metab,1994,79:643649.
[3] Harrington DJ,Lessey BA,Rai V,Bergqvist A,Kennedy S,Manek S,Barlow DH,Mardon HJ.Tenascin is differentially expressed in endometrium and endometriosis.J Pathol,1999,187(2):242248.
[4] Hermanson M,Funa K,Hartman M,et al.Plateletderived growth factor and its receptors in human glioma tissue:expression of messenger RNA and protein suggests the presence of autocrine and paracrine loops.Cancer Res,1992,52(11):32133219.
[5] Tallquist M,Kazlauskas A.PDGF signaling in cells and mice.Cytokine Growth Factor Rev,2004,15(4):205213.
[6] 刘中砚,杨镇.周细胞与微血管相关疾病.微循环学杂志,2005,15(3):5557.
[7] Anan K,Morisaki T,Katano M,et al.Vascular endothelial growth factor and plateletderived growth factor are potential angiogenic and metastatic factors in human breast cancer.Surgery,1996,119(3):333339.
[8] Betsholtz C,Lindblom P,Bjarnegard M,Enge M,et al.Role of plateletderived growth factor in mesangium development and vasculopathies:lessons from plateletderived growth factor and plateletderived growth factor receptor mutations in mice.Curr Opin Nephrol Hypertens,2004,13(1):4552.Review.
[9] Pietras K,Rubin K,Sjoblom T,et al.Inhibition of PDGF receptor signaling in tumor stroma enhances antitumor effect of chemotherapy.Cancer Res,2002,62(19):547684.
[10] Pietras K,Ostman A,Sjoquist M,et al.Inhibition of plateletderived growth factor receptors reduces interstitial hypertension and increases transcapillary transport in tumors.Cancer Res,2001,61(7):29292934.
【关键词】
血小板源性生长因子;甲状腺乳头状癌;免疫组织化学
Expression and Significance of PDGFA in Papillary Thyroid Cancer
WANG Xinzheng,CHANG Guangqi,YANG Jing.
【Abstract】 Objective To investigate the expression and significance of PDGFA in papillary thyroid cancer.Methods Immunohistochemistry was use to examinated the expression of PDGFA in papillary thyroid cancer and normal thyroid tissues.Results Protein expressions of PDGFA in disease group(median HSCORE 1.92;SEM 0.46)and in control group(median HSCORE 0.38;SEM 0.05)were significantly different(P<0.05).The expression of PDGFA protein in disease group increased significantly.Conclusion The overexpression of PDGF in PTC cell indicated that PDGF correlated intimately with PTC and involved in the formation and development of PTC.PDGF might become a potential diagnostic marker of PTC and a new target of cancer therapy.
【Key words】
Plateletderived growth factorA(PDGFA);Papillary thyroid cancer(PTC);Immunohistochemistry
DOI:10.3760/cma.j.issn 16738799.2010.01.25
作者单位:471000河南科技大学第一附属医院普外三科(王新征);
中山大学第一附属医院外三科(常光奇); 洛阳第三人民医院(杨晶)
甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)是最常见的甲状腺恶性甲状腺肿瘤。Matsuo K等发现在人甲状腺乳头状癌细胞系NPA培养过的条件培养基中有能强烈促进NIH3T3细胞系生长的物质,其促有丝分裂的活性可被血小板源性生长因子抗体部分的阻断,经鉴定为血小板源性生长因子链样的蛋白物质,而在人甲状腺滤泡状癌细胞系WRO中却没有这种物质。由此认为人甲状腺乳头状癌细胞系NPA可分泌大量血小板源性生长因子样的蛋白物质,此种物质可能对人甲状腺乳头状癌特征性乳头状结构的形成具有重要作用[1]。本实验的目的是通过免疫组化技术检测甲状腺乳头状癌组织中血小板源性生长因子A链(plateletderived growth factorA,PDGFA)蛋白的表达,初步探讨PDGF与甲状腺乳头状癌的关系。
1 材料和方法
1.1 临床资料 35例甲状腺乳头状癌组织标本取自中山大学第一附属医院2002~2006年行甲状腺癌根治术患者存档的石蜡块,其中男9例,女26例,年龄11~74岁,患者术前均未经过任何抗肿瘤治疗,术后经病理检验证实为甲状腺乳头状癌。35例正常的甲状腺组织标本取自中山大学第一附属医院2002~2006年甲状腺腺瘤或节结性甲状腺肿手术患者切除标本的存档石蜡块中相对正常的甲状腺组织,其中男6例,女29例,年龄16~73岁。
1.2 试剂及染色方法 兔抗人血小板源性生长因子A链多克隆抗体购自武汉博士德公司;二抗选用DAKO公司GK50075 EnVision两步法试剂盒。所有标本均5μm 厚连续切片。切片常规脱腊后行常规HE染色,镜下观察鉴定病变性质及部位,以确定所采用的标本的正确性。免疫组化染色检测按EnVision两步法试剂盒说明操作,用TBS液代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果分析方法 先在10×10倍光镜下观察免疫组化玻片染色结果,随机选取10个细胞分布较均匀的视野,每个视野在4×100下随机计数50个细胞。根据细胞棕黄色着色的强度按下列记分方法分为4个等级:0分=无着色,1分=轻度着色,2分=中度着色,3分=强着色,然后按公式HSCORE=Σ(i+1)Pi(这里i=1,2,3,Pi=评分为i的细胞/该例标本总观察细胞×100%)计算得到的HSCORE(histochemical score)得分[2,3]代表该张切片PDGFA链蛋白表达
的水平进行统计分析。该评分法考虑到了单个细胞是否阳性及其强弱,更具体更全面的反应细胞的蛋白表达情况。
1.4 统计学方法 用SAS8.1软件包采用Wilcoxon秩和检验比较病例组与对照组数据,以P<0.05为显著性意义的标准。
2 结果
PDGFA链主要表达于肿瘤细胞的胞浆中,在细胞膜上也有表达,而在癌旁的间质中很少表达。甲状腺乳头状癌病例组(HSCORE中位数=1.92,SEM=0.46)与对照组(HSCORE中位数0.38,SEM=0.05)PDGFA链的表达有显著差异,P<0.05。PDGFA链在甲状腺乳头状癌病例组中较对照组明显过度表达。设定HSCORE得分≥0.6分者为阳性,则病例组阳性率68.6%,而对照组阳性率仅为17.1%。
表1
病例组與对照组PDGFA阳性率及
免疫组化得分HSCORE分布情况
得分
PDGFA
病例组对照组
3~90
2~80
1~43
0.6~33
0~1127
阳性率68.6%17.1%
注:阳性率为设定HSCORE得分≥0.6分者为阳性计算结果
3 讨论
甲状腺乳头状癌的发病是一个错综复杂的过程,通过长期不断的研究人们对甲状腺乳头状癌的病因和致病因素的认识不断加深。近年来分子生物学的发展,人们逐渐认识到一些癌基因和生长因子在甲状腺乳头状癌的发病和发展中起着重要的作用。PDGF是目前人们研究较多的一种生长因子。目前国外的研究结果显示PDGF促进细胞恶性转化和肿瘤生长的作用很可能是通过肿瘤细胞中形成的PDGF的自分泌回路等机制过度激活PDGF受体介导的受体酪氨酸蛋白激酶细胞信号传导通路从而引起细胞的增殖转化[4,5]。另外越来越多的资料显示PDGF与肿瘤新生血管的形成关系密切[6,7,8]。PDGF及其受体对肿瘤组织间液高压的形成中起着重要作用,而组织间液压力(interstitial fluid pressure,IFP)较正常组织升高是许多实体性肿瘤共有的特点[9,10]。这些都提示了PDGF在多种恶性肿瘤的发生和发展中所起的重要作用,是很有前途的分子水平肿瘤治疗干预措施的靶向。但目前PDGF与甲状腺乳头状癌的关系仍不明了,我们的试验结果显示PDGFA在甲状腺乳头状癌中存在过度表达,其表达在甲状腺乳头状癌与正常甲状腺组织之间的差异明显,提示PDGFA在甲状腺乳头状癌的发病和发展中起到了一定的作用。联系到PDGF在其他多种恶性肿瘤的发生和发展中所起的重要作用,PDGF很有希望成为甲状腺乳头状癌的一个潜在辅助诊断因子及治疗靶点。
圖1 PDGFA在甲状腺乳头状癌中的阳性表达(200×)
图2 PDGFA在甲状腺乳头状癌中的阳性表达(400×)
图3 正常甲状腺组织中PDGFA的弱阳性表达(200×)
图4 正常甲状腺组织中PDGFA的弱阳性表达(200×)
参考文献
[1] Matsuo K,Tang SH,Sharifi B.Growth factor production by human thyroid carcinoma cells:abundant expression of a plateletderived growth factorBlike protein by a human papillary carcinoma cell line.J Clin Endocrinol Metab,1993,77(4):9961004.
[2] Lessey BA,Castelbaum AJ,Sawin SW,et al.Aberrant integrin expression in the endometrium of women with endometriosis.J Clin Endocrinol Metab,1994,79:643649.
[3] Harrington DJ,Lessey BA,Rai V,Bergqvist A,Kennedy S,Manek S,Barlow DH,Mardon HJ.Tenascin is differentially expressed in endometrium and endometriosis.J Pathol,1999,187(2):242248.
[4] Hermanson M,Funa K,Hartman M,et al.Plateletderived growth factor and its receptors in human glioma tissue:expression of messenger RNA and protein suggests the presence of autocrine and paracrine loops.Cancer Res,1992,52(11):32133219.
[5] Tallquist M,Kazlauskas A.PDGF signaling in cells and mice.Cytokine Growth Factor Rev,2004,15(4):205213.
[6] 刘中砚,杨镇.周细胞与微血管相关疾病.微循环学杂志,2005,15(3):5557.
[7] Anan K,Morisaki T,Katano M,et al.Vascular endothelial growth factor and plateletderived growth factor are potential angiogenic and metastatic factors in human breast cancer.Surgery,1996,119(3):333339.
[8] Betsholtz C,Lindblom P,Bjarnegard M,Enge M,et al.Role of plateletderived growth factor in mesangium development and vasculopathies:lessons from plateletderived growth factor and plateletderived growth factor receptor mutations in mice.Curr Opin Nephrol Hypertens,2004,13(1):4552.Review.
[9] Pietras K,Rubin K,Sjoblom T,et al.Inhibition of PDGF receptor signaling in tumor stroma enhances antitumor effect of chemotherapy.Cancer Res,2002,62(19):547684.
[10] Pietras K,Ostman A,Sjoquist M,et al.Inhibition of plateletderived growth factor receptors reduces interstitial hypertension and increases transcapillary transport in tumors.Cancer Res,2001,61(7):29292934.