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（黑龙江神志医院）
摘 要：本实验以肉桂酸为指标对清解防感颗粒提取工艺进行研究。清解防感颗粒最佳提取工艺为加入14倍量水，煎煮100分钟，连续提取2次。本工艺稳定、可行、收率高。
关键词：清解防感颗粒；提取；工艺
清解防感颗粒由生甘草、金银花、玄参、陈皮、大枣组成。清解防感颗粒主要用于防治甲型H1N1流感。玄参为清解防感颗粒主要成分之一。玄参为双子叶植物玄参科Scrophulariaceae玄参Scrophularia ningpoensisHemsl. 的干燥根。玄参具有清热凉血，泻火解毒，滋阴的功效。玄参用于温热病热入营血、烦躁、夜寐不安、口渴舌绛、神识不清或身发斑疹等症。《玉楸药解》记载：“玄参，清金补水，凡疮疡热痛，胸膈燥渴，溲便红涩，膀胱癃闭之证俱善。清肺与陈皮、杏仁同服，利水合茯苓、泽泻同服。”玄参具有抗炎、保肝、抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗心肌肥大、抗脑缺血、抗血小板聚集等作用[1-5]。本实验以肉桂酸为指标对清解防感颗粒提取工艺进行研究。
1 仪器与试药
便携式PH计（北京恒奥德仪器仪表有限公司）；色谱柱温箱（北京国谱科技有限公司）；科捷液相/LC600A梯度液相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司）；双频数控加热超声波清洗器（上海汗诺仪器有限公司）；电子分析天平（白山市玖久仪器仪表有限公司）。肉桂酸对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（天津赛孚瑞科技有限公司）；磷酸（寿光市鲁科化工有限责任公司）；三乙胺（天津赛孚瑞科技有限公司）；甲醇（天津赛孚瑞科技有限公司）；冰醋酸（天津赛孚瑞科技有限公司）；磷酸二氢钾（天津赛孚瑞科技有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 提取次数
按处方称取生甘草、陈皮、玄参，粉碎为20目，分别至于圆底烧瓶内，分别加入金银花、大枣，分别提取三次，第一次加10倍水，每次煎煮120分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩；第二次加10倍水，每次煎煮120分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍水，每次煎煮120分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中肉桂酸含量并计算肉桂酸收率。
2.1.2 药材粉碎目数
按处方称取生甘草、玄参，分别粉碎为10目、20目、40目，分别至于圆底烧瓶内，分别加入金银花、大枣，加10倍水，每次煎煮120分钟，连续煎煮2次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中肉桂酸含量并计算肉桂酸收率。
2.1.3 加水倍数
按处方称取生甘草、陈皮、玄参，粉碎为20目，分别至于圆底烧瓶内，分别加入金银花、大枣，分别提取三次，第一次加14倍水，每次煎煮120分钟，连续2次，第二次加12倍水，每次煎煮120分钟，连续2次，第三次加10倍水，每次煎煮120分钟，连续2次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中肉桂酸含量并计算肉桂酸收率。
2.1.4 提取时间
按处方称取生甘草、陈皮、玄参，粉碎为20目，分别至于圆底烧瓶内，分别加入金银花、大枣，分别提取三次，第一次加10倍水，每次煎煮140分鐘，连续2次，第二次加10倍水，每次煎煮120分钟，连续2次，第三次加10倍水，每次煎煮100分钟，连续2次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中肉桂酸含量并计算肉桂酸收率。
2.2 正交试验设计
实验结果表明，粉碎目数对肉桂酸收率影响不大，提取次数、加水倍数和提取时间对肉桂酸收率影响较大。选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 含量测定
3.1 流动相考察
分别考察甲醇-水（35：65），乙腈与1%醋酸溶液梯度洗脱，乙腈-1%冰醋酸溶液（20∶80），甲醇-乙腈-水-三乙胺（7：22：73：0.1）用磷酸调pH5，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-冰醋酸（70：30：1）不同比例的流动相，结果以乙腈与1%醋酸溶液梯度洗脱为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈与1%醋酸溶液梯度洗脱为流动相。
3.2 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相以乙腈为流动相A，以1%醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按肉桂酸铵峰计算应不得低于2000。
3.3 供试品溶液的制备
取提取膏适量，精密称取，加50%甲醇10毫升，超声处理五分钟，转移至25毫升容量瓶内，50%甲醇定容，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
3.4 对照品溶液的制备
分别精密称取肉桂酸对照品5mg，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
3.5 标准曲线的制备
将浓度为50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，肉桂酸对照品在50～300μg/ml范围内线性关系良好。
3.5 回收率试验
取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的肉桂酸对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为98.33%，RSD为0.95%。
4 实验结果
解防感颗粒最佳提取工艺为加入14倍量水，煎煮100分钟，连续提取2次。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]李静，陈长勋，高阳，焦亚斌，吴喜民，王瑞，吴迎春，李医明.玄参提取物抗炎与抗动脉硬化作用的探索[J].时珍国医国药，2010（03）.
[2]尚雁君，李医明，蒋山好，朱大元，魏善建，焦炳华，黄才国.玄参中苯丙素苷Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响[J].解放军药学学报，2006（01）.
[3]李静，陈长勋，高阳，焦亚斌，吴喜民，王瑞，吴迎春，李医明.玄参提取物抗炎与抗动脉硬化作用的探索[J].时珍國医国药，2010（03）.
[4]李医明，曾华武，贺祥，姜远英，蒋山好，朱大元.玄参中环烯醚萜甙和苯丙素甙对LTB4产生及血小板聚集的影响[J].第二军医大学学报，1999（05）.
[5]黄才国，李医明，贺祥，魏善建，姜华.玄参中苯丙素苷XS-8对兔血小板cAMP和兔血浆中PGI2/TXA2的影响[J].第二军医大学学报，2004（08）.
摘 要：本实验以肉桂酸为指标对清解防感颗粒提取工艺进行研究。清解防感颗粒最佳提取工艺为加入14倍量水，煎煮100分钟，连续提取2次。本工艺稳定、可行、收率高。
关键词：清解防感颗粒；提取；工艺
清解防感颗粒由生甘草、金银花、玄参、陈皮、大枣组成。清解防感颗粒主要用于防治甲型H1N1流感。玄参为清解防感颗粒主要成分之一。玄参为双子叶植物玄参科Scrophulariaceae玄参Scrophularia ningpoensisHemsl. 的干燥根。玄参具有清热凉血，泻火解毒，滋阴的功效。玄参用于温热病热入营血、烦躁、夜寐不安、口渴舌绛、神识不清或身发斑疹等症。《玉楸药解》记载：“玄参，清金补水，凡疮疡热痛，胸膈燥渴，溲便红涩，膀胱癃闭之证俱善。清肺与陈皮、杏仁同服，利水合茯苓、泽泻同服。”玄参具有抗炎、保肝、抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗心肌肥大、抗脑缺血、抗血小板聚集等作用[1-5]。本实验以肉桂酸为指标对清解防感颗粒提取工艺进行研究。
1 仪器与试药
便携式PH计（北京恒奥德仪器仪表有限公司）；色谱柱温箱（北京国谱科技有限公司）；科捷液相/LC600A梯度液相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司）；双频数控加热超声波清洗器（上海汗诺仪器有限公司）；电子分析天平（白山市玖久仪器仪表有限公司）。肉桂酸对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（天津赛孚瑞科技有限公司）；磷酸（寿光市鲁科化工有限责任公司）；三乙胺（天津赛孚瑞科技有限公司）；甲醇（天津赛孚瑞科技有限公司）；冰醋酸（天津赛孚瑞科技有限公司）；磷酸二氢钾（天津赛孚瑞科技有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 提取次数
按处方称取生甘草、陈皮、玄参，粉碎为20目，分别至于圆底烧瓶内，分别加入金银花、大枣，分别提取三次，第一次加10倍水，每次煎煮120分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩；第二次加10倍水，每次煎煮120分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍水，每次煎煮120分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中肉桂酸含量并计算肉桂酸收率。
2.1.2 药材粉碎目数
按处方称取生甘草、玄参，分别粉碎为10目、20目、40目，分别至于圆底烧瓶内，分别加入金银花、大枣，加10倍水，每次煎煮120分钟，连续煎煮2次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中肉桂酸含量并计算肉桂酸收率。
2.1.3 加水倍数
按处方称取生甘草、陈皮、玄参，粉碎为20目，分别至于圆底烧瓶内，分别加入金银花、大枣，分别提取三次，第一次加14倍水，每次煎煮120分钟，连续2次，第二次加12倍水，每次煎煮120分钟，连续2次，第三次加10倍水，每次煎煮120分钟，连续2次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中肉桂酸含量并计算肉桂酸收率。
2.1.4 提取时间
按处方称取生甘草、陈皮、玄参，粉碎为20目，分别至于圆底烧瓶内，分别加入金银花、大枣，分别提取三次，第一次加10倍水，每次煎煮140分鐘，连续2次，第二次加10倍水，每次煎煮120分钟，连续2次，第三次加10倍水，每次煎煮100分钟，连续2次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中肉桂酸含量并计算肉桂酸收率。
2.2 正交试验设计
实验结果表明，粉碎目数对肉桂酸收率影响不大，提取次数、加水倍数和提取时间对肉桂酸收率影响较大。选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 含量测定
3.1 流动相考察
分别考察甲醇-水（35：65），乙腈与1%醋酸溶液梯度洗脱，乙腈-1%冰醋酸溶液（20∶80），甲醇-乙腈-水-三乙胺（7：22：73：0.1）用磷酸调pH5，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-冰醋酸（70：30：1）不同比例的流动相，结果以乙腈与1%醋酸溶液梯度洗脱为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈与1%醋酸溶液梯度洗脱为流动相。
3.2 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相以乙腈为流动相A，以1%醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按肉桂酸铵峰计算应不得低于2000。
3.3 供试品溶液的制备
取提取膏适量，精密称取，加50%甲醇10毫升，超声处理五分钟，转移至25毫升容量瓶内，50%甲醇定容，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
3.4 对照品溶液的制备
分别精密称取肉桂酸对照品5mg，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
3.5 标准曲线的制备
将浓度为50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，肉桂酸对照品在50～300μg/ml范围内线性关系良好。
3.5 回收率试验
取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的肉桂酸对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为98.33%，RSD为0.95%。
4 实验结果
解防感颗粒最佳提取工艺为加入14倍量水，煎煮100分钟，连续提取2次。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]李静，陈长勋，高阳，焦亚斌，吴喜民，王瑞，吴迎春，李医明.玄参提取物抗炎与抗动脉硬化作用的探索[J].时珍国医国药，2010（03）.
[2]尚雁君，李医明，蒋山好，朱大元，魏善建，焦炳华，黄才国.玄参中苯丙素苷Acteoside对小鼠高尿酸血症的影响[J].解放军药学学报，2006（01）.
[3]李静，陈长勋，高阳，焦亚斌，吴喜民，王瑞，吴迎春，李医明.玄参提取物抗炎与抗动脉硬化作用的探索[J].时珍國医国药，2010（03）.
[4]李医明，曾华武，贺祥，姜远英，蒋山好，朱大元.玄参中环烯醚萜甙和苯丙素甙对LTB4产生及血小板聚集的影响[J].第二军医大学学报，1999（05）.
[5]黄才国，李医明，贺祥，魏善建，姜华.玄参中苯丙素苷XS-8对兔血小板cAMP和兔血浆中PGI2/TXA2的影响[J].第二军医大学学报，2004（08）.