【摘 要】
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目的 构建rhLEDGF p52基因原核表达载体,获得rhLEDGF p52蛋白.方法 利用基因重组技术将rhLEDGF p52基因构建于原核表达载体pET30a(+)中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,
【机 构】
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400038,重庆市,中国人民解放军第三军医大学附属西南医院眼科
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目的 构建rhLEDGF p52基因原核表达载体,获得rhLEDGF p52蛋白.方法 利用基因重组技术将rhLEDGF p52基因构建于原核表达载体pET30a(+)中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,经免疫蛋白印迹试验对rhLEDGF p52进行鉴定并用Ni-NTAA His.Bind.Resin方法进行纯化.结果 成功构建rhLEDGF p52基因原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得可溶性形式表达,rhLEDGF p52蛋白表达量占菌体蛋白总量的34.63%.Western Blot结果显示rhLEDGF2蛋白能够特异性与LEDGF-ab结合.Ni-NTA His.Bind.Resin方法进行纯化后的rhLEDGF p52,最终质量浓度达520 mg·L-1,分析其纯度达87.93%.结论 成功获得rhLEDGF p52蛋白,这为深入研究其生物学功能奠定了基础.
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