【摘 要】
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目的 应用显微鉴别和基于ITS2序列差异的可视化探针杂交技术鉴别阳春砂、疣果砂仁、海南假砂仁.方法 采用徒手切片法对砂仁及其混淆品的种子进行制片并观察其显微生物.然后提
【机 构】
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河北中医学院,河北省中药炮制技术创新中心,石家庄050000
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目的 应用显微鉴别和基于ITS2序列差异的可视化探针杂交技术鉴别阳春砂、疣果砂仁、海南假砂仁.方法 采用徒手切片法对砂仁及其混淆品的种子进行制片并观察其显微生物.然后提取阳春砂、疣果砂仁、海南假砂仁的总基因组DNA,PCR扩增其ITS2序列,回收PCR产物并连接T载体,筛选阳性质粒并测序,根据测序所得ITS2序列设计阳春砂的专属荧光探针,并取探针1 ng与砂仁及其混淆品的ITS2 PCR扩增产物进行液相杂交.反应条件:95℃变性5 min,70℃退火30 s,在489 nm荧光下进行激发检测.结果 阳春砂与其混淆品的显微结构区别主要在于色素层的层数和外胚乳细胞的形状.所设计的专属探针仅与阳春砂ITS2PCR产物特异性结合,而不与其混淆品结合.亦可以通过荧光的强弱来定量鉴别中成药中砂仁的掺伪现象.结论 通过显微鉴别和基于ITS2序列差异的可视化探针杂交技术能够很好地鉴别砂仁的真伪,且不要求中药的具体形式,方法简便快捷、成本低、技术门槛低,开拓了更加便捷、准确的砂仁药材的鉴别方法.
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