【摘 要】
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目的 运用GST?pull down技术检测真核细胞中R?Ras活化蛋白的表达,用以分析R?Ras活化蛋白影响细胞迁移的体外实验.方法 筛选稳定表达pcDNA3.1、pcDNA3.1R?Ras和pcDNA3.1R?Ras3
【机 构】
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牡丹江医学院生物学教研室,黑龙江牡丹江,157011
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目的 运用GST?pull down技术检测真核细胞中R?Ras活化蛋白的表达,用以分析R?Ras活化蛋白影响细胞迁移的体外实验.方法 筛选稳定表达pcDNA3.1、pcDNA3.1R?Ras和pcDNA3.1R?Ras38V的MCF7细胞系;同时构建pGEX6p1的融合蛋白表达载体,并使其在大肠杆菌BL21中大量表达用于GST?pull down实验.进一步用Western Blot检测MCF7细胞中活化的R?Ras蛋白的表达;然后用基底膜侵袭实验进一步分析稳转后R?Ras活化蛋白对细胞迁移的影响.结果 成功获得融合蛋白的表达,用GST?Pull down和Western Blot技术检测出MCF7细胞中过表达活化的R?Ras蛋白.Transwell实验显示pcDNA3.1R?Ras38V组穿膜细胞数减少,与pcDNA3.1组和pcDNA3.1R?Ras组比较差异有统计学意义(P=0.0007、0.0065).结论 过表达活化的R?Ras蛋白抑制细胞的迁移,GST?pull down技术可以检测R?Ras的蛋白活化形式,为进一步深入研究R?Ras在真核细胞中的体外功能实验提供了保障.
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