【摘 要】
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本文通过牛肝线粒体细胞色素Tb5和它的F35Y突变体蛋白相对分子质量的外标法测定,得到细胞色素Tb5全蛋白的相对分子质量为10 077.5;脱辅基蛋白的相对分子质量为9461.4.F35Y突
【机 构】
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中国科学院上海有机化学研究所,,复旦大学化学系,,中国药科大学分析计算中心,
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本文通过牛肝线粒体细胞色素Tb5和它的F35Y突变体蛋白相对分子质量的外标法测定,得到细胞色素Tb5全蛋白的相对分子质量为10 077.5;脱辅基蛋白的相对分子质量为9461.4.F35Y突变体全蛋白的相对分子质量为10093.6,它的脱辅基蛋白的相对分子质量为9477.5.不同nozzle电压下的电喷雾质谱结果表明,该电压的大小明显影响蛋白肽链与血红素辅基之间的非共价结合.随着电压的降低,全蛋白质谱峰的强度逐渐增大.然而,过低的电压导致了Na+,K+离子加合峰相对强度的增加,而不利于谱图分析.同时,考虑到细胞色素Tb5在甲醇溶液和酸性溶液中的变性行为,因此选择nozzle电压70V,10%的甲醇水溶液和pH=7为得到全蛋白质谱峰的最佳条件.相同实验条件下得到的野生型Cyt Tb5和F35Y突变体全蛋白的质谱峰相比较,其相对丰度有悬殊的差异,表明F35Y突变体蛋白的血红素结合能力明显低于野生型蛋白.通过对解离出的Heme b的分子离子峰进行解析,证明铁仍以三价离子存在于血红素辅基中.
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