【摘 要】
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目的：研究健脾消癌方干预肠癌细胞外泌体对巨噬细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法：将50只大鼠随机分为正常组和健脾消癌方含药血清组，每组25只，健脾消癌方含药血清组以健脾消癌方水煎液灌胃，正常组大鼠每日以等量蒸馏水灌胃，1次/d，连续7 d后获取含药血清和不含药血清。将对数生长期的HCT116细胞分为JPXAF组、WY组，JPXAF组予20%健脾消癌方含药血清干预，WY组以20%不含药血
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81774287）； 湖南省研究生科研创新项目（CX20190567）；
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目的：研究健脾消癌方干预肠癌细胞外泌体对巨噬细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法：将50只大鼠随机分为正常组和健脾消癌方含药血清组，每组25只，健脾消癌方含药血清组以健脾消癌方水煎液灌胃，正常组大鼠每日以等量蒸馏水灌胃，1次/d，连续7 d后获取含药血清和不含药血清。将对数生长期的HCT116细胞分为JPXAF组、WY组，JPXAF组予20%健脾消癌方含药血清干预，WY组以20%不含药血清干预，采用超速离心法提取外泌体，JPXAF组、WY组提取的外泌体分别命名为JPXAF-Exo、WY-Exo。将THP-1巨噬细胞分为对照组和外泌体组，对照组进行常规培养，外泌体组予HCT116细胞外泌体干预。采用反转录酶-聚合酶链反应（RTPCR）检测细胞MMP2 mRNA、MMP9mRNA、TNF-α mRNA、PD-L1 mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达量。将THP-1巨噬细胞随机分为Control组、WY-Exo组、JPXAF-Exo组。Control组常规培养，WY-Exo组、JPXAF-Exo组分别予WY-Exo、JPXAF-Exo干预。采用RT-PCR法检测巨噬细胞中MMP2 mRNA、MMP9 mRNA、TNF-αmRNA、PDL1 mRNA、TGF-β1 mRNA的表达，采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测细胞TGF-β RⅡ、Smad2/3蛋白的表达水平及Smad2/3蛋白的磷酸化水平。结果：外泌体组巨噬细胞中PD-L1 mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达量均高于对照组（P＜0.01）；外泌体组巨噬细胞中MMP2 mRNA、MMP9 mRNA、TNF-α mRNA相对表达量与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）;JPXAF-Exo组巨噬细胞MMP9 mRNA相对表达量低于Control组、WY-Exo组（P＜0.05）;WY-Exo组、JPXAF-Exo组巨噬细胞PD-L1 mRNA的表达明显高于Control组（P＜0.01）;WY-Exo组巨噬细胞TGF-β1 mRNA相对表达量明显高于Control组（P＜0.01）;JPXA-Exo组巨噬细胞TGF-β1 mRNA相对表达量显著低于Control组、WY-Exo组（P＜0.05或P＜0.01）。JPXA-Exo组巨噬细胞TGF-β RⅡ、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达均低于WY-Exo组（P＜0.01）。结论：健脾消癌方含药血清可通过外泌体抑制TGF-β1/Smad信号通路改善外泌体介导的肿瘤转移前微环境从而抑制结直肠癌的转移。
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