论文部分内容阅读
摘要：以香蕉枯萎病病菌4号生理小种和西瓜枯萎病病菌野生型菌株作为供试菌，以常用的悬滴法和载玻片法为对照，对改良培养皿法进行比较试验。结果表明，使用改良培养皿法，FOC-4R和FW菌株处理8h后，孢子萌发率分别为77.3％和92.7％，远高于2个对照方法，初步说明用改良培养皿孢子萌发法进行孢子萌发是最佳的萌发方法。
关键词：香蕉枯萎病病菌；西瓜枯萎病病菌；悬滴法；载玻片法；改良培养皿法
孢子萌发是植物病理学真菌病害试验研究中经常用到的手段，比如可以作为鉴定某些真菌性状的方法，孢子的萌发试验又是杀菌剂药效测定的主要方法。同时对于某些病害的接种。也需要大量的孢子。在研究病原真菌的生活史、病害的侵染循环及病害的发生和流行条件等方面，也都涉及到孢子的萌发问题。因此，如何快速高效得到高萌发率的孢子，也是植物病理研究中重要的手段和方法。改良培养皿法是笔者在实际试验过程中探索研究出的一种高效快速促使香蕉枯萎病病菌孢子萌发的方法。传统的孢子萌发方法主要有悬滴法、载玻片萌发法、培养皿萌发法、琼脂平板表面萌发法及其他特殊方法。笔者在试验中主要采用悬滴法和载玻片萌发法作为比较方法。
1 材料与方法
1.1试验材料
菌种：香蕉枯萎病病菌4号生理小种(FOC-4R)，由中国热带农业科学院环境与植物保护研究所谢艺贤课题组提供：西瓜枯萎病病菌野生型菌株(FW)。由张新春所在课题组保存。
1.2试验方法
对改良培养皿萌发法进行试验，以悬滴法和载玻片萌发法为对照。(1)分别取香蕉枯萎病和西瓜枯萎病病原菌菌株，在PDA培养基上置于28℃培养箱内进行单孢培养，待菌丝长满培养皿后，置于光照下28℃连续照射4d，诱导孢子的产生。(2)用适量无菌水冲洗菌落表面，得到孢子液。用4层纱布过滤得到孢子液，取滤液用无菌水配成孢子悬浮液，使孢子体积浓度为105个／mL。(3)参照方中达的方法，取配制好的孢子悬浮液进行悬滴法和载玻片萌发法操作试验。(4)把从步骤2得到的部分孢子悬浮液离心。弃上清液，保留孢子备用。(5)无菌条件下，把灭过菌的微孔滤膜平铺在备好的PDA平板上，使微孔滤膜与培养基表面紧密接触。微孔滤膜大小以刚能全部遮住培养基为准。(6)把离心得到的孢子平铺到滤膜上，用三角玻璃棒摊匀。用封口膜封口后置于28℃培养箱中培养。(7)3种处理均在培养5、8h后观察孢子萌发率。每个处理观察10个视野。孢子萌发标准：以芽管长度超过孢子直径长度(指直径最小的一边)的一半。视为已经萌发的孢子。
2 结果与分析
2.1不同试验方法FoC-4R孢子萌发率比较
表1试验结果显示，使用了改良培养皿萌发法的FOC4R菌株无论在萌发5h或8h后，孢子萌发率都明显高于载玻片萌发法和悬滴法2种对照方法，并且在8h的萌发率高达77.3％
2.2不同试验方法FW孢子萌发率比较
表2试验结果显示，使用了改良培养皿法的FW菌株，孢子萌发率无论是处理后5h还是8h，萌发率都远高于载玻片萌发法和悬滴法，且在8h后的萌发率高达92.7％。
3 讨论与结论
改良培养皿萌发法是在原有培养皿萌发法基础上改进而来的。笔者在试验过程中。因为需要萌发率相当高的孢子做研究，而FOC-4R和FW这2种孢子需要在高湿度环境中才能萌发，在试验了现行的几种孢子萌发方法后。均达不到理想的要求，因此设计和改良了培养皿萌发方法。结果发现，用改良培养皿法进行孢子萌发试验。萌发率可以很容易控制达到试验要求。如果需要全部萌发。对于香蕉枯萎病病菌4号生理小种，萌发时间控制在10h即可；对于西瓜枯萎病病菌，只需8h即可。
本试验结果是在以香蕉枯萎病病菌和西瓜枯萎病病菌2种菌为材料的基础上得到的。而这2种菌的孢子萌发都需要高湿环境，因此对于需要高湿条件才能萌发的孢子，此方法是可行的。但对于不需要高湿环境，特别是高湿环境不利于萌发的其他类型的病菌孢子，此方法未必有效。另外，由于本试验只用了2种菌，且萌发时间只选择了2个时间段。因此若需要了解其他菌种的萌发率，此方法可作为借鉴。
关键词：香蕉枯萎病病菌；西瓜枯萎病病菌；悬滴法；载玻片法；改良培养皿法
孢子萌发是植物病理学真菌病害试验研究中经常用到的手段，比如可以作为鉴定某些真菌性状的方法，孢子的萌发试验又是杀菌剂药效测定的主要方法。同时对于某些病害的接种。也需要大量的孢子。在研究病原真菌的生活史、病害的侵染循环及病害的发生和流行条件等方面，也都涉及到孢子的萌发问题。因此，如何快速高效得到高萌发率的孢子，也是植物病理研究中重要的手段和方法。改良培养皿法是笔者在实际试验过程中探索研究出的一种高效快速促使香蕉枯萎病病菌孢子萌发的方法。传统的孢子萌发方法主要有悬滴法、载玻片萌发法、培养皿萌发法、琼脂平板表面萌发法及其他特殊方法。笔者在试验中主要采用悬滴法和载玻片萌发法作为比较方法。
1 材料与方法
1.1试验材料
菌种：香蕉枯萎病病菌4号生理小种(FOC-4R)，由中国热带农业科学院环境与植物保护研究所谢艺贤课题组提供：西瓜枯萎病病菌野生型菌株(FW)。由张新春所在课题组保存。
1.2试验方法
对改良培养皿萌发法进行试验，以悬滴法和载玻片萌发法为对照。(1)分别取香蕉枯萎病和西瓜枯萎病病原菌菌株，在PDA培养基上置于28℃培养箱内进行单孢培养，待菌丝长满培养皿后，置于光照下28℃连续照射4d，诱导孢子的产生。(2)用适量无菌水冲洗菌落表面，得到孢子液。用4层纱布过滤得到孢子液，取滤液用无菌水配成孢子悬浮液，使孢子体积浓度为105个／mL。(3)参照方中达的方法，取配制好的孢子悬浮液进行悬滴法和载玻片萌发法操作试验。(4)把从步骤2得到的部分孢子悬浮液离心。弃上清液，保留孢子备用。(5)无菌条件下，把灭过菌的微孔滤膜平铺在备好的PDA平板上，使微孔滤膜与培养基表面紧密接触。微孔滤膜大小以刚能全部遮住培养基为准。(6)把离心得到的孢子平铺到滤膜上，用三角玻璃棒摊匀。用封口膜封口后置于28℃培养箱中培养。(7)3种处理均在培养5、8h后观察孢子萌发率。每个处理观察10个视野。孢子萌发标准：以芽管长度超过孢子直径长度(指直径最小的一边)的一半。视为已经萌发的孢子。
2 结果与分析
2.1不同试验方法FoC-4R孢子萌发率比较
表1试验结果显示，使用了改良培养皿萌发法的FOC4R菌株无论在萌发5h或8h后，孢子萌发率都明显高于载玻片萌发法和悬滴法2种对照方法，并且在8h的萌发率高达77.3％
2.2不同试验方法FW孢子萌发率比较
表2试验结果显示，使用了改良培养皿法的FW菌株，孢子萌发率无论是处理后5h还是8h，萌发率都远高于载玻片萌发法和悬滴法，且在8h后的萌发率高达92.7％。
3 讨论与结论
改良培养皿萌发法是在原有培养皿萌发法基础上改进而来的。笔者在试验过程中。因为需要萌发率相当高的孢子做研究，而FOC-4R和FW这2种孢子需要在高湿度环境中才能萌发，在试验了现行的几种孢子萌发方法后。均达不到理想的要求，因此设计和改良了培养皿萌发方法。结果发现，用改良培养皿法进行孢子萌发试验。萌发率可以很容易控制达到试验要求。如果需要全部萌发。对于香蕉枯萎病病菌4号生理小种，萌发时间控制在10h即可；对于西瓜枯萎病病菌，只需8h即可。
本试验结果是在以香蕉枯萎病病菌和西瓜枯萎病病菌2种菌为材料的基础上得到的。而这2种菌的孢子萌发都需要高湿环境，因此对于需要高湿条件才能萌发的孢子，此方法是可行的。但对于不需要高湿环境，特别是高湿环境不利于萌发的其他类型的病菌孢子，此方法未必有效。另外，由于本试验只用了2种菌，且萌发时间只选择了2个时间段。因此若需要了解其他菌种的萌发率，此方法可作为借鉴。