观察对氧磷酶1(PON1)基因过表达对急性敌敌畏中毒所致小鼠膈肌细胞损伤的影响。
方法常规培养小鼠膈肌细胞，转染过表达慢病毒载体，将细胞分为正常对照组，敌敌畏(DDVP)组，LV–GFP＋DDVP组，LV–PON1＋DDVP组，CCK–8法检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞的凋亡情况、RT–PCR及Western印迹法检测小鼠膈肌细胞PON1和Nrf2 mRNA及蛋白的表达情况、ELISA法检测细胞乙酰胆碱酯酶(AchE)、血红素氧合酶1(HO–1)、醌氧化还原酶1(NQO–1)水平，化学比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)水平。
结果0、80、160、320、640 μmol/L DDVP诱导小鼠膈肌细胞24 h后，细胞的生存率分别为(100±3.82)%、(82.13±2.60)%、(53.57±5.05)%、(30.77±3.30)%、(14.20±2.19)%，呈浓度依赖性；以160 μmol/L DDVP分别诱导小鼠膈肌细胞0、6、12、24 h后，细胞的存活率分别为(100.17±2.74)%、(76.13±6.01)%、(66.53±3.55)%、(53.57±5.05)%，呈时间依赖性(P<0.05)。LV–PON1组细胞PON1蛋白表达高于空白对照组(0.370±0.015与0.232±0.004，0.197±0.015与0.037±0.003，P<0.05)。DDVP诱导后，不同时间点LV–PON1组细胞存活率高于DDVP组(P<0.05)。诱导24 h，LV–PON1组凋亡率及MDA含量低于DDVP组(P<0.05)。LV–PON1组AchE水平、PON1和Nrf2蛋白表达水平、SOD和CAT、HO–1和NQO–1水平均高于DDVP组(P<0.05)。
结论PON1基因过表达可以有效减轻DDVP对小鼠膈肌细胞AchE的抑制作用，可以诱导Nrf2的表达，发挥抗氧化作用，从而保护小鼠膈肌细胞。