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目的：建立以高效液相色谱手性固定相法拆分乳酸对映体、测定乳酸光学纯度的方法。方法：采用Chirex3126（D）-青霉胺为手性色谱柱，以硫酸铜水溶液-异丙醇（85：15）作为流动相，流速为0．6mL·min^-1，检测波长为254nm，测定不同光学纯度的乳酸样品并与旋光法比较。结果：乳酸对映体在色谱柱上得到了基线分离且分离因子大于1．2，检测浓度线性范围为0．75～48．24mg·mL^-1（r=0．9993），RSD=1．21％；4批样品光学纯度测定结果与旋光法一致。结论：本方法操作