论文部分内容阅读
目的
探讨cyclin D1在宫颈上皮内瘤变及鳞状细胞癌中的表达及其与HPV16 E7基因表达的相关性。
方法SiHa、Hcc94细胞均为宫颈上皮来源的鳞癌细胞，其中Hcc94细胞的E6/E7基因缺失。采用即时荧光定量PCR、免疫组织化学法检测cyclin D1在子宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞状细胞癌组织中基因及蛋白的表达情况；采用逆转录PCR(RT－PCR)、Western blot、免疫组织化学方法检测cyclin D1在不同E7表达状态的鳞状细胞癌细胞系的表达情况；设计靶向HPV16 E7基因启动子区的siRNA序列，构建质粒转染SiHa细胞，筛选稳定沉默E7基因的细胞系命名为cm－16细胞株；将空质粒转染SiHa细胞，获得空质粒细胞系命名为B3细胞株。用RT－PCR和Western blot检测E7沉默cm－16细胞cyclin D1基因及蛋白表达情况。
结果cyclin D1仅在正常宫颈鳞状上皮副基底细胞中表达，在CIN1、CIN2、CIN3表达降低，在HPV阳性的宫颈鳞状细胞癌中阴性或少量点灶状表达；cyclin D1在E7阳性SiHa细胞中的表达水平较cm－16及Hcc94细胞减低(均P<0.05)。
结论E7高表达的子宫颈癌组织及细胞中cyclin D1低表达，HPV E7基因抑制子宫颈癌cyclin D1表达。