【摘 要】
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为表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)中和抗原表位COE蛋白,分析其免疫原性,为PEDV的检测和亚单位疫苗的开发奠定基础.参考GenBank中PEDV COE基因序列,人工合成并经生物信息学综合分析后,将合成的基因片段插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a-COE,将鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希氏菌TransB(DE3)中,用IPTG诱导目的蛋白表达,并进行SDS-PAGE鉴定;然后用纯化的目的蛋白与弗氏不完全佐
【机 构】
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石河子大学生命科学学院,新疆石河子 832000
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为表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)中和抗原表位COE蛋白,分析其免疫原性,为PEDV的检测和亚单位疫苗的开发奠定基础.参考GenBank中PEDV COE基因序列,人工合成并经生物信息学综合分析后,将合成的基因片段插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a-COE,将鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希氏菌TransB(DE3)中,用IPTG诱导目的蛋白表达,并进行SDS-PAGE鉴定;然后用纯化的目的蛋白与弗氏不完全佐剂乳化,免疫猪后用ELISA方法检测猪血清中PEDV特异性抗体水平.结果表明,目的蛋白在大肠埃希氏菌TransB(DE3)中获得表达,用His标签纯化得到了与预期大小35 ku相符的COE融合蛋白,经复性、浓缩后的蛋白浓度为1.85 mg/mL.用该蛋白作为亚单位疫苗免疫猪,ELISA方法检测免疫猪产生了高滴度的血清PEDV特异性抗体.表明原核表达的COE蛋白具有良好的免疫原性,可作为候选的亚单位疫苗.
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