莪术醇对人胃癌细胞株BGC823增殖的影响及其机制

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目的 观察莪术醇对人胃癌细胞株BGC823细胞周期的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养BGC823细胞,分别加入12.5、25.0、50.0、100.0 mg/L莪术醇,对照组加入10 ml/L无水乙醇,分别孵育24、48 h.采用噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验分析莪术醇对BGC823细胞增殖的影响.流式细胞术测定细胞周期的变化.100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,收集细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和p16 mRNA的表达,Western blot测定PCNA、Cyclin D1、CDK4和p16蛋白的表达水平.结果 MTT结果显示,莪术醇剂量和时间依赖性抑制BGC823细胞增殖,莪术醇为12.5、25.0、50.0、100.0 mg/L时对BGC823细胞抑制率在24h分别为(13.59±2.74)%、(22.51±4.62)%、(46.09±6.14)%、(73.67±8.24)%,在48 h分别为(15.02±2.26)%、(25.31±4.79)%、(53.62±6.37)%、(82.14±9.65)%;克隆形成实验结果显示,莪术醇具有剂量依赖性抑制BGC823细胞克隆形成率的能力,莪术醇为12.5、25.0、50.0、100.0 mg/L作用14 d时BGC823细胞克隆形成率为(0.88±0.14)%、(0.57±0.09)%、(0.36±0.06)%、(0.11±0.02)%;流式细胞结果显示,莪术醇处理48 h后,G0/G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少,且随浓度增高变化更为明显(P<0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,PCNA和Cyclin D、CDK4mRNA和蛋白表达显著下降,p16 mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.05).PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16的mRNA在对照组相对表达量为0.64±0.16、0.57 ±0.12、0.46±0.06、0.26±0.04,在莪术醇组为0.31±0.07、0.19 ±0.05、0.15±0.04、0.59±0.09;各指标蛋白的相对表达量在对照组为0.84 ±0.21、0.62 ±0.17、0.74±0.19、0.35±0.06,在莪术醇组为0.43 ±0.09、0.26±0.07、0.22±0.06、0.64±0.16.结论 莪术醇可使BGC823细胞周期阻滞于G0/G1期而抑制其增殖,其主要机制可能与下调PCNA、Cyclin D和CDK4表达、上调p16表达有关.
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