【摘 要】
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目的 旨在揭示miR-3677-3p在胃癌组织中的表达情况,及其是否通过靶向RAP1 GTPase激活蛋白(RAP1GAP)影响胃癌细胞的增殖、凋亡和侵袭功能.方法 收集2016-10-10-2018-06-08陕西省人民医院手术治疗的40例胃癌患者癌和癌旁组织(距离癌组织边缘>5 cm),qRT-PCR检测miR-3677-3p在临床组织标本及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SNU-1、AGS、HGC-27、SGC-7901)的表达情况.选取AGS细胞进行转染,分为NC inhibitor组
【机 构】
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陕西省人民医院普外二科,陕西西安710068;陕西省人民医院病理科,陕西西安710068;陕西省人民医院肿瘤内科,陕西西安710068
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目的 旨在揭示miR-3677-3p在胃癌组织中的表达情况,及其是否通过靶向RAP1 GTPase激活蛋白(RAP1GAP)影响胃癌细胞的增殖、凋亡和侵袭功能.方法 收集2016-10-10-2018-06-08陕西省人民医院手术治疗的40例胃癌患者癌和癌旁组织(距离癌组织边缘>5 cm),qRT-PCR检测miR-3677-3p在临床组织标本及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SNU-1、AGS、HGC-27、SGC-7901)的表达情况.选取AGS细胞进行转染,分为NC inhibitor组、miR-3677-3p inhibitor 组、NC mimics 组、miR-3677-3p mimics 组、si-NC 组、si-RAP1GAP 组和 si-RAP1GAP+miR-3677-3p inhibitor组.采用qRT-PCR检测转染效率,CCK-8法、流式细胞仪和Transwell分别检测转染NC inhibitor、miR-3677-3p inhibitor、si-RAP1GAP+miR-3677-3p inhibitor对AGS细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.各组数据经Shapiro-Wilk检验符合正态分布,2组比较采用t检验,多组比较采用单因素方差分析,组间的多重比较采用LSD-t检验.结果 miR-3677-3p在胃癌组织的相对表达量(2.443±1.006)显著高于癌旁对照组织(1.000±0.265),差异有统计学意义,t=8.941,P<0.001.miR-3677-3p 在胃癌细胞株 SNU-1(1.975±0.310)、AGS(2.439±0.635)、HGC-27(2.223±0.462)和SGC-7901(1.604±0.405)相对表达水平显著高于GES-1细胞(1.000±0.173),差异有统计学意义,F=8.846,P<0.001.miR-3677-3p inhibitor 组细胞增殖水平(0.873±0.132)与 NC inhibitor 组(1.323±0.122)相比显著下降,差异有统计学意义,t=5.598,P<0.001.miR-3677-3p inhibitor 组细胞凋亡比例(33.11±5.36)与 NC inhibitor组(9.17±2.12)相比显著增高,差异有统计学意义,t=9.287,P<0.001.穿过Transwell小室的细胞数量miR-3677-3p inhibitor 组(78.52±21.25)与 NC inhibitor 组(232.30±33.65)相比显著下降,差异有统计学意义,t=8.642,P<0.001.双荧光素酶报告基因结果显示miR-3677-3p能够结合RAP 1 GAP的3\'UTR.RAP1GAP的mRNA相对表达水平miR-3677-3p inhibitor 组(3.210±0.540)显著高于 NC inhibitor 组(1.000±0.242),差异有统计学意义,t=8.351,P<0.001,蛋白质印迹法也得出了类似结果.功能回复实验显示,si-RAP1GAP部分逆转了 miR-3677-3p inhibitor对AGS细胞的增殖、凋亡和侵袭的影响.结论 miR-3677-3p在胃癌组织和细胞中高表达,其可能通过靶向抑制RAP1GAP的表达,进而调控了胃癌细胞的增殖、凋亡和侵袭.
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