滤过道瘢痕化及人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增生是抗青光眼滤过手术失败的主要原因。目前已有羟喜树碱诱导成纤维细胞凋亡及其机制的相关报道，但是羟喜树碱对HTFs自噬的影响鲜见报道。
目的探讨羟喜树碱对体外培养的HTFs自噬的影响。
方法收集3例接受斜视手术患者的Tenon囊组织，以组织块培养法，用含体积分数10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基原代培养HTFs并传代，取第3～6代细胞进行培养。分别在培养基中加入0.0、0.5、1.0、4.0、10.0 mg/L羟喜树碱，继续培养HTFs 24 h，以细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞的增生情况。选取4.0 mg/L羟喜树碱作用HTFs 24 h，用Cyto-ID自噬检测试剂盒进行荧光染色，观察各组细胞中自噬小体和自噬溶酶体成分的分布，用荧光显微镜和流式细胞仪分别对Cyto-ID染色阳性细胞数量及其荧光强度进行测定，并与对照组比较。用逆转录定量检测PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测各组HTFs中自噬相关蛋白Beclin-1、自噬相关基因5(ATG-5)和微管相关蛋白1轻链3(LC-3)蛋白及其mRNA的相对表达水平。
结果随着羟喜树碱质量浓度的增加，HTFs细胞活力逐渐下降，0.0、0.5、1.0、4.0、10.0 mg/L羟喜树碱组HTFs细胞活力的总体差异有统计学意义(F＝19.040，P<0.001)，1.0、4.0、10.0 mg/L羟喜树碱组HTFs的细胞活力均低于对照组，以10.0 mg/L组最低，差异均有统计学意义(P<0.05，P<0.01，P<0.01)。qRT-PCR检测显示，4.0 mg/L羟喜树碱组HTFs中Beclin-1 mRNA、ATG-5 mRNA和LC-3 mRNA的相对表达量分别是对照组的(3.225±0.346)、(2.839±0.418)和(3.761±0.224)倍，与对照组比较差异均有统计学意义(P＝0.020、0.027、0.007)。Western blot检测表明，4.0 mg/L羟喜树碱组HTFs中Beclin-1、ATG-5和LC-3蛋白表达的灰度值较对照组明显上升，LC-3Ⅱ/Ⅰ灰度值比值分别为0.965±0.159和0.275±0.860，差异均有统计学意义(P＝0.003)。Cyto-ID染色结果显示，4.0 mg/L羟喜树碱处理后，HTFs自噬阳性细胞的比例由未处理的(11.333±4.010)%上升到(55.000±9.013)%，差异有统计学意义(P＝0.002)。流式细胞仪检测表明，4.0 mg/L羟喜树碱处理后24 h Cyto-ID染色的平均荧光强度是对照组的(3.037±0.513)倍，差异有统计学意义(P＝0.003)。
结论羟喜树碱能诱导体外培养的HTFs发生自噬。