拟南芥MnSOD的原核表达、纯化及抗体制备

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PCR扩增拟南芥MnSOD cDNA的保守区段,构建pET-SOD重组质粒,转化大肠杆菌JM109(DE3),IPTG诱导融合蛋白高效表达;经检测表达产物占菌体总蛋白的69%,且以不溶的包涵体形式存在;表达产物变性后经Ni-NTA Superflow亲和柱分离纯化,得到相对分子质量约为29 000的PAGE纯蛋白.融合蛋白经还原复性处理后,比活达到200U/mg;免疫家兔制备MnSOD融合蛋白抗体,抗体效价为1:10 000.以上结果为进一步大规模制备MnSOD及其功能研究奠定基础.
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