【摘 要】
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口蹄疫（Foot-and-mouth disease, FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）引起的急性、高度传染性疾病，一旦大规模爆发会给畜牧业造成巨大的经济损失。接种灭活病毒疫苗是目前防控口蹄疫的最有效手段，但传统灭活疫苗存在病毒逃逸、生产成本高等诸多局限。重组亚单位蛋白疫苗免疫原性好且安全性高，是发展新型口蹄疫疫苗的重要方向。口蹄疫病毒
【机 构】
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四川大学华西药学院靶向药物及释药系统教育部重点实验室
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口蹄疫（Foot-and-mouth disease, FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）引起的急性、高度传染性疾病，一旦大规模爆发会给畜牧业造成巨大的经济损失。接种灭活病毒疫苗是目前防控口蹄疫的最有效手段，但传统灭活疫苗存在病毒逃逸、生产成本高等诸多局限。重组亚单位蛋白疫苗免疫原性好且安全性高，是发展新型口蹄疫疫苗的重要方向。口蹄疫病毒结构蛋白VP1因含主要抗原表位，而成为口蹄疫亚单位疫苗及诊断试剂的开发热点。与真核系统相比，原核表达系统生产周期短、易于放大生产、成本低廉，更适于动物疫苗的开发，但VP1采用原核系统表达会形成无活性的不溶包涵体。本工作中首次同时融合小分子泛素相关修饰物（Small ubiquitin-related modifier, SUMO）和RNA作用结构域（RNA-interacting domain,RID）两种助溶标签来实现FMDV VP1 （O型/MYA/98）在原核系统中的高效可溶表达。首先采用PCR重叠技术，以p ET-28a（+）为载体构建了RID-SUMO-VP1重组质粒，将重组质粒转化至E. coli BL21（DE3），在18oC下通过1 mmol/L IPTG诱导4 h后，融合蛋白RID-SUMO-VP1高效表达，可溶表达比例达79%，而融合SUMO或RID单一标签的VP1仍主要表达为不溶的包涵体。然后采用硫酸铵两步沉淀法对工程菌的破碎上清进行纯化，得到纯度为93%的RID-SUMO-VP1,ELISA实验表明其能够与O型FMDV阳性小鼠血清反应。研究结果表明，采用RID及SUMO双标签融合策略能极大提高VP1在原核系统中的可溶表达效率，且表达的VP1具备良好的抗原性，这为开发新型FMDV免疫诊断试剂和安全高效的亚单位疫苗奠定了良好基础。
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