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摘要：目的 建立一种简便实用的芦竹根药材中总生物碱的含量测定方法，为芦竹根药材的质量控制提供依据。方法 采用紫外分光光度法，以芦竹碱为对照品，测定波长280nm。结果 芦竹碱在0.02 ～ 0.28mg /ml浓度范围内线性关系良好，回归方程Y =35.78668X-0.282122，R= 0.99991（n = 8），平均加样回收率为97.40%，相对标准偏差（RSD）为1.09%，测定结果在7h内稳定，RSD = 0.64%。结论 所建立的芦竹根药材中总生物碱含量测定方法准确、简便、稳定，可以用于芦竹根药材的质量控制。
关键词：芦竹根;总生物碱;芦竹碱;紫外分光光度法
芦竹根（Rhzioma Aurndinsi Donacsi）[1]，又名芦荻头，楼梯杆，为禾本科植物芦竹（Arundo donax L.）的新鲜或干燥根茎，入药首载于《岭南采药录》。芦竹根味甘、微苦、性寒，具有清热泻火、止呕生津，利尿通淋的功效[2]，主治热病发狂，虚劳骨蒸，淋病，小便不利，风火牙痛等症。临床上主要用于治疗小儿上呼吸道感染引起的高热症，疗效确切，为中药制剂芦黄冲剂和去感热注射液的主要原料药材。其主要成分为多种吲哚类生物碱，有降压解痉作用，能拮抗组织胺、5-羟色胺、乙酰胆碱引起的痉挛[3，4]。目前，关于其生物碱的提取分离、结构分析[5-7]等研究较多。因此，本文以芦竹碱为对照品，采用紫外分光光度法测定芦竹根中总生物碱的含量，为芦竹根药材的质量控制提供依据。
1.仪器与试药
仪器：Cary100双光束紫外-可见分光光度仪（美国瓦里安公司）
AB250D 型电子天平（美国丹法）
R205型旋转蒸发仪（上海申胜生物科技有限公司）
芦竹根药材（购自四川省成都市）
芦竹碱对照品（沃凯，国药集团化学试剂有限公司 批号：20130419）
乙醇、三氯甲烷、氢氧化钠 盐酸，浓氨水（市售分析纯）
2 方法与结果
2.1对照品贮备液的制备
取芦竹碱对照品约50mg，精密称定，置250mL量瓶中，加入乙醇至刻度，摇匀，得到0.198 mg/ml对照品贮备液。
2.2供试品溶液的制备
药材100g，粉碎成粗粉，乙醇500ml回流提取3次，每次1小时，纱布过滤、抽滤，用80% 的乙醇溶液冲洗药渣3 次，合并滤液和洗液，提取液减压回收乙醇至无醇味，浓缩成浸膏，浓缩物用水稍稀释，加入适量的2% HCl溶解该膏状物质，并将酸液移至分液漏斗中，加适量氯仿洗涤3次，弃去氯仿层，酸水液加入浓氨水调节pH 值在10以上，再加适量氯仿萃取4次，将氯仿层移入250mL 容量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，即得供试液。吸取供试液5.0mL于干燥的250mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，以无水乙醇为参比，在280nm 处测定吸光度。
3 方法学考察
2.3测定波长的选择
以乙醇为空白对照，将标准对照品溶液、样品供试液和空白对照液在200～ 700波长范围内进行扫描。结果显示前两者在210nm和280 nm 左右均有最大吸收，切在280 nm处吸收峰峰形较好，且空白对照液在280nm 处几乎没有吸收，故本实验选择280nm为测定波长，结果见图1。
图1 波长扫描图 a芦竹碱对照品 b供试品 c空白溶液
2.4标准曲线的制备
分别精密量取对照品贮备液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4ml于10 ml容量瓶，乙醇定容至刻度。以乙醇为空白于280nm测定吸光度值。以芦竹碱对照品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，计算得回归方程Y=0.00266+36.14772X，r= 0.99991（n = 8），芦竹碱在0.02 ～ 0.28mg /ml浓度范围内与吸光度值呈良好的线性关系。
2.5稳定性试验
室温下取对照品贮备液，分别在1，2，3，4，5，6，7h后，于280nm处测定吸光度。结果7 h内稳定，RSD=0.28%。
2.6精密度试验
精密移取上述标准贮备液0.4，0.8，1.2mL于10mL比色管中，以无水乙醇定容，于280nm处测定吸光度。同日内各浓度平行測定5次，计算其日内精密度RSD分别为0.5960%、0.8520%、0.5389%;各浓度每日测定一次，连续测定5日，计算其日间精密度RSD分别为1.01%、0.973%、0.751%。
2.5 重复性试验
取按2.2 样品溶液的制备方法平行制备5 份样品溶液，按样品测定项下方法测定吸收度并计算，其RSD为0.74%。
2.8加样回收率试验
精密量取已知总生物碱含量的芦竹根样品液一式9份各5ml 置于10 m l容量瓶中，分别加入浓度为0.198mg/ml的对照品溶液0.3 m 无水乙醇定容，摇匀后依法测定，计算其平均加样回收率为97.4%，RSD =1.09%。
2.9样品测定
精密量取不同批次芦竹根总生物碱提取物3份，按2.2的方法制备样品供试液和空白对照液，在280 nm 处分别测定吸光度并计算其总生物碱平均含量为0.189%。
4 讨论
1、在样品的处理过程中要避免样品乳化，否则会给测定带来较大的偏差，因此必须仔细观察，氯仿层分取的时机要尽量把握一致。 2、從稳定性试验的数据来看，测定结果在7h 内是稳定的，但考虑到氯仿的挥发以及仪器的寿命因素，测定最好在1h 内完成。
3、在测定波长选择过程中，发现芦竹碱在280nm处吸收较好，芦竹根提取液的最大吸收在283nm而且吸收峰比较宽，在280nm测定其含量误差较小，最终确定280nm处为其含量测定的吸收波长。另外吸收峰较宽说明芦竹根总生物碱中主要含有吲哚类生物碱。
4、采用本方法所建立的芦竹根药材中总生物碱含量测定方法准确、简便、稳定，可以用于芦竹根药材的质量控制，为芦竹根的进一步开发和质量研究奠定基础。
参考文献：
[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科技出版社，1986，1077-1079.
[2]孙琪华，白权.芦根与芦竹根的鉴别探讨[J].川北医学院学报，1994，9（4）：38-39.
[3]Ghosal S，Bhattacharya SK.A rundo donax L.（Graminae）.phytochemical and pharmacological evaluation[J].J Med Chem，1969，12（3）：480-483.
[4]ZhalolovL，KhuzhaevVU.Alkaloids of Arudo donax1 Ⅷ.3-Alkylindole derivatives in A.donax[J].Chem Nat Comp，2000，36（5）：528-530.
[5]K.A.Ubaidullaev，R.Shakirov，and S.Yu，Yunusov.Alkaloids of Arundo donax the structure of donaxaridine and donaxarine[J].Chemistry of natural compounds，1976，12（4）：499-500.
[6]V.U.Khuzhaev，S.F.Aripova，and U.A.Abdullaev.Alkaloids of Arundo donax.IV.donaxaninea new pyrrolidine alkaloid from Arundo donax[J].Chemistry of Natural Compounds，1995，31（5）：728-730.
[7]V.U.Khuzhaev，I.Zh.Zhalolov，M.G.Levkovich，S.F.Aripova，A.S.Shashkov.Alkaloids of Arundo donax L.15.A new dimeric indole alkaloid arundarine from the roots of Arundo donax L.[J].Russian Chemical Bulletin，2004，53（8）：1765-1767.
关键词：芦竹根;总生物碱;芦竹碱;紫外分光光度法
芦竹根（Rhzioma Aurndinsi Donacsi）[1]，又名芦荻头，楼梯杆，为禾本科植物芦竹（Arundo donax L.）的新鲜或干燥根茎，入药首载于《岭南采药录》。芦竹根味甘、微苦、性寒，具有清热泻火、止呕生津，利尿通淋的功效[2]，主治热病发狂，虚劳骨蒸，淋病，小便不利，风火牙痛等症。临床上主要用于治疗小儿上呼吸道感染引起的高热症，疗效确切，为中药制剂芦黄冲剂和去感热注射液的主要原料药材。其主要成分为多种吲哚类生物碱，有降压解痉作用，能拮抗组织胺、5-羟色胺、乙酰胆碱引起的痉挛[3，4]。目前，关于其生物碱的提取分离、结构分析[5-7]等研究较多。因此，本文以芦竹碱为对照品，采用紫外分光光度法测定芦竹根中总生物碱的含量，为芦竹根药材的质量控制提供依据。
1.仪器与试药
仪器：Cary100双光束紫外-可见分光光度仪（美国瓦里安公司）
AB250D 型电子天平（美国丹法）
R205型旋转蒸发仪（上海申胜生物科技有限公司）
芦竹根药材（购自四川省成都市）
芦竹碱对照品（沃凯，国药集团化学试剂有限公司 批号：20130419）
乙醇、三氯甲烷、氢氧化钠 盐酸，浓氨水（市售分析纯）
2 方法与结果
2.1对照品贮备液的制备
取芦竹碱对照品约50mg，精密称定，置250mL量瓶中，加入乙醇至刻度，摇匀，得到0.198 mg/ml对照品贮备液。
2.2供试品溶液的制备
药材100g，粉碎成粗粉，乙醇500ml回流提取3次，每次1小时，纱布过滤、抽滤，用80% 的乙醇溶液冲洗药渣3 次，合并滤液和洗液，提取液减压回收乙醇至无醇味，浓缩成浸膏，浓缩物用水稍稀释，加入适量的2% HCl溶解该膏状物质，并将酸液移至分液漏斗中，加适量氯仿洗涤3次，弃去氯仿层，酸水液加入浓氨水调节pH 值在10以上，再加适量氯仿萃取4次，将氯仿层移入250mL 容量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，即得供试液。吸取供试液5.0mL于干燥的250mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，以无水乙醇为参比，在280nm 处测定吸光度。
3 方法学考察
2.3测定波长的选择
以乙醇为空白对照，将标准对照品溶液、样品供试液和空白对照液在200～ 700波长范围内进行扫描。结果显示前两者在210nm和280 nm 左右均有最大吸收，切在280 nm处吸收峰峰形较好，且空白对照液在280nm 处几乎没有吸收，故本实验选择280nm为测定波长，结果见图1。
图1 波长扫描图 a芦竹碱对照品 b供试品 c空白溶液
2.4标准曲线的制备
分别精密量取对照品贮备液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4ml于10 ml容量瓶，乙醇定容至刻度。以乙醇为空白于280nm测定吸光度值。以芦竹碱对照品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，计算得回归方程Y=0.00266+36.14772X，r= 0.99991（n = 8），芦竹碱在0.02 ～ 0.28mg /ml浓度范围内与吸光度值呈良好的线性关系。
2.5稳定性试验
室温下取对照品贮备液，分别在1，2，3，4，5，6，7h后，于280nm处测定吸光度。结果7 h内稳定，RSD=0.28%。
2.6精密度试验
精密移取上述标准贮备液0.4，0.8，1.2mL于10mL比色管中，以无水乙醇定容，于280nm处测定吸光度。同日内各浓度平行測定5次，计算其日内精密度RSD分别为0.5960%、0.8520%、0.5389%;各浓度每日测定一次，连续测定5日，计算其日间精密度RSD分别为1.01%、0.973%、0.751%。
2.5 重复性试验
取按2.2 样品溶液的制备方法平行制备5 份样品溶液，按样品测定项下方法测定吸收度并计算，其RSD为0.74%。
2.8加样回收率试验
精密量取已知总生物碱含量的芦竹根样品液一式9份各5ml 置于10 m l容量瓶中，分别加入浓度为0.198mg/ml的对照品溶液0.3 m 无水乙醇定容，摇匀后依法测定，计算其平均加样回收率为97.4%，RSD =1.09%。
2.9样品测定
精密量取不同批次芦竹根总生物碱提取物3份，按2.2的方法制备样品供试液和空白对照液，在280 nm 处分别测定吸光度并计算其总生物碱平均含量为0.189%。
4 讨论
1、在样品的处理过程中要避免样品乳化，否则会给测定带来较大的偏差，因此必须仔细观察，氯仿层分取的时机要尽量把握一致。 2、從稳定性试验的数据来看，测定结果在7h 内是稳定的，但考虑到氯仿的挥发以及仪器的寿命因素，测定最好在1h 内完成。
3、在测定波长选择过程中，发现芦竹碱在280nm处吸收较好，芦竹根提取液的最大吸收在283nm而且吸收峰比较宽，在280nm测定其含量误差较小，最终确定280nm处为其含量测定的吸收波长。另外吸收峰较宽说明芦竹根总生物碱中主要含有吲哚类生物碱。
4、采用本方法所建立的芦竹根药材中总生物碱含量测定方法准确、简便、稳定，可以用于芦竹根药材的质量控制，为芦竹根的进一步开发和质量研究奠定基础。
参考文献：
[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科技出版社，1986，1077-1079.
[2]孙琪华，白权.芦根与芦竹根的鉴别探讨[J].川北医学院学报，1994，9（4）：38-39.
[3]Ghosal S，Bhattacharya SK.A rundo donax L.（Graminae）.phytochemical and pharmacological evaluation[J].J Med Chem，1969，12（3）：480-483.
[4]ZhalolovL，KhuzhaevVU.Alkaloids of Arudo donax1 Ⅷ.3-Alkylindole derivatives in A.donax[J].Chem Nat Comp，2000，36（5）：528-530.
[5]K.A.Ubaidullaev，R.Shakirov，and S.Yu，Yunusov.Alkaloids of Arundo donax the structure of donaxaridine and donaxarine[J].Chemistry of natural compounds，1976，12（4）：499-500.
[6]V.U.Khuzhaev，S.F.Aripova，and U.A.Abdullaev.Alkaloids of Arundo donax.IV.donaxaninea new pyrrolidine alkaloid from Arundo donax[J].Chemistry of Natural Compounds，1995，31（5）：728-730.
[7]V.U.Khuzhaev，I.Zh.Zhalolov，M.G.Levkovich，S.F.Aripova，A.S.Shashkov.Alkaloids of Arundo donax L.15.A new dimeric indole alkaloid arundarine from the roots of Arundo donax L.[J].Russian Chemical Bulletin，2004，53（8）：1765-1767.