论文部分内容阅读
【摘 要】 目的：建立黔产苗药见血青药材的质量标准。方法：对不同产地黔产见血青药材进行性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别;参照《中国药典》2015年版四部通则方法对黔产见血青药材水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行测定。结果：薄层色谱斑点清晰，分离好，专属性强，无干扰;初步规定黔产见血青药材水分不得过15.0%，总灰分不得过11.0%，酸不溶性灰分不得过6.0%，水溶性浸出物含量不得少于10.0%。结论：该方法操作简便、结果可靠，能够为黔产苗药见血青药材质量评价提供一定的实验数据。
【关键词】 见血青;苗药;质量标准;薄层色谱
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）3-0044-03
Abstract：Objective To establish the preliminary quality standard for miao national herb Liparis nervosa（Thunb.Ex A.Murray）Lindl. produced in Guizhou province.Methods Trait identification， microscopic identification and TLC were used for qualitative identification of samples.According to the approaches listed in Chinese Pharmacopoeia published in 2015， some testing items including the moisture content， total ash，acid-insoluble ash and extract were established.Results TLC spots were clear， well-separated without interference and had a strong specificity.The moisture， total ash and acid-insoluble ash of samples were no more than 15.0%， 11.0%， 6.0%，respectively;The water-soluble extractives were no less than 10.0%.Conclusion The quality standard is simple， reliable and can provide some experimental data for the quality evaluation of miao national herb Liparis nervosa（Thunb.Ex A.Murray）Lindl.produced in Guizhou.
Keywords：Liparis nervosa Lindl;Miao National Herb;Quality Standard;TLC
見血青为兰科植物见血青Liparis nervosa（Thunb.Ex A.Murray）Lindl.的干燥全草[1]，在夏、秋季节采收，除去杂质，晒干。见血青在《全国中草药汇编》第3版和《中国植物志》第十八卷均有记载[1-2]。文献报道该植物中含有含脉羊耳兰碱、原儿茶酸等成分[3-5]，具有凉血止血、清热解毒的作用，主要用于胃热吐血、肺热咯血、热毒疮疡、蛇咬伤。见血青同时作为贵州省少数民族药材品种，民间中医、民族地区使用广泛，被誉为苗医“止血圣药”，苗族地区常用于治疗刀伤、跌打损伤。作为贵州省民族药材，现无质量标准控制其质量，且目前中国食品药品检定研究院无脉羊耳兰碱对照品和见血青对照药材。因此，本研究以贵州省药检所相关专家鉴定为正品的见血青药材作为见血青对照药材，对黔产苗药见血青药材的性状、显微、薄层、水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物进行测定，并对水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物项目确定了检查限度，初步建立了黔产见血青药材质量标准，为该药材质量评价提供一定的实验数据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 DM2500光学生物显微镜（德国徕卡仪器公司）;DFC500图像分析系统（德国徕卡仪器公司）;AB265-S梅特勒电子天平（梅特勒有限公司）;FW80高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。
1.2 药物与试剂 见血青药材分别采集于贵州各地（详见表1），经贵阳中医学院药学院生药实验室江维克教授鉴定为兰科植物见血青Liparis nervosa（Thunb.Ex A.Murray）Lindl.的干燥全草，凭证标本存放于遵义市食品药品检验所。见血青对照药材（批号：201710-06，贵州省食品药品检验所提供）。石油醚（批号：20170509，天津市科密欧化学试剂有限公司）、乙酸乙酯（批号：20170509，天津市科密欧化学试剂有限公司）、乙醚（批号：20180202，成都金山化学试剂有限公司）、无水乙醇（批号：20180312，天津市科密欧化学试剂有限公司）均为分析纯，硅胶G板（批号：20170818，青岛海洋化工厂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 性状鉴别 依据《药用植物学》[6]对植物根茎叶花果的分类鉴别和《中国药典》[7]2015版对其它药材性状的规范描述，观察12个见血青样品，其性状特征总结如下：根状茎上着生细长的须根数条。假鳞茎圆柱形，长2.5～7.0cm，具节，基部有灰白色膜质叶柄残基。单叶互生，2～5片，黄绿色，质薄，略皱缩;展开后呈卵形或卵椭圆形，长5～16cm，宽2.5～6cm，先端尖，基部成鞘状抱茎，脉3～8条。总状花序顶生，淡紫色，常可见宿存的蒴果;蒴果纺锤形，长0.8～1.5cm，宽0.4～0.6cm。气微，味苦。 2.2 显微鉴别[8] 通过对12个药材样品的粉末进行观察和测量，其显微鉴别特征总结如下：本品粉末棕黄色或棕褐色;厚壁细胞呈不规则形;单细胞非腺毛，壁厚或螺纹状纹理;导管为梯纹导管或网纹导管，直径5～30μm;草酸钙针晶较细，长25～80μm ，多成束存在。如图1所示。
2.3 薄层鉴别[9] 分别取贵州12个产地见血青药材粉末约1.0g，加石油醚（60～90℃）10mL，超声处理30分钟，滤过，水浴蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。另取见血青对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（2015年版《中国药典》四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙醚 （3∶[KG-*3/5]2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。详见图2。
2.4 检查
2.4.1 水分测定水分测定 按2015年版《中国药典》通则0832第二法测定，12批见血青药材水分测定结果为11.03～13.62%，平均值12.51%，暂定水分不得过15.0%。结果详见表2。
2.4.2 总灰测定分灰分测定 按2015年版《中国药典》通则2302测定，12批见血青药材测定结果为8.62～9.66%，平均值9.16%，暂定总灰分不得过11.0%。结果详见表2。
2.4.3 酸不溶性灰分灰分测定 按2015年版《中国药典》通则2302测定， 12批样品测定结果为4.71～5.54%，平均值5.14%，暂定酸不溶性灰分不得过6.0%。结果详见表2。
2.5 水溶性浸出物含量测定浸出物测定 按2015版《中国药典》通则2201冷浸法测定，测定12批样品的结果为12.02～13.56%，平均值12.67%，测定结果详见表2。根据测定结果，暂定浸出物标准不得少于10.0%。
3 讨论
黔产见血青为贵州常用民族药材，本研究对不同产地的黔产见血青药材性状特征、显微特征进行了归纳总结。摸索了TLC条件，分别以石油醚（60～90℃）-乙醚（5∶[KG-*3/5]1）、石油醚（60～90℃）-乙醚-乙酸乙酯 （5∶[KG-*3/5]2∶[KG-*3/5]0.1）、石油醚（60～90℃）-乙醚 （3∶[KG-*3/5]2）为展开剂，展开，作为展开剂，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。其中以石油醚（60～90℃）-乙醚 （3∶[KG-*3/5]2）為展开剂的薄层色谱图斑点明显、荧光斑点清晰、专属性强，并按照国家药典委员会《中药分析方法验证指导原则实施细则》的相关要求进行方法学耐用性考察，重现性好。分别用无水乙醇、80%乙醇、70%乙醇、水作溶剂，采用冷浸法和热浸法依次测定黔产见血青浸出物含量。根据测定结果，以水为溶剂，冷浸法效果最佳，初步确定浸出物限量。按2015年版《中国药典》通则方法对水分、总灰分和酸不溶性灰分进行测定，初步确定各限量标准。
综上所述，本研究能够为黔产苗药见血青药材质量评价提供一定的实验数据。笔者将继续对该药材质量标准深入研究，以规范苗药见血青的生产，促进苗药现代化发展。
参考文献
[1]王国强.全国中草药汇编（第2卷）[M]. 北京：人民卫生出版社，2014：247.
[2]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第18卷）[M]. 北京：科学出版社，1996：71.
[3]赵颖，胡少南 ，王昌华，等. 见血青化学成分研究 [J]. 中草药，2013， 44（21）：2955-2959.
[4]李国平，王珏蓉，郑诗雪，等.见血青总生物碱提取工艺优化 [J]. 武夷学院学报，2016， 35（3）： 1-4.
[5]赵颖，胡少南 ，王昌华，等.兰科植物见血青乙酸乙酯部位化学成分研究 [J]. 中国实验方剂学杂志，2013， 22（19）： 111-113.
[6]姚振声. 药用植物学[M]. 北京：中国中医药出版社，2007.
[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015.
[8]康廷国. 中药鉴定学[M]. 北京：中国中医药出版社，2003.
[9]冯华，石尚友，罗秀琼，等.黔产见血青药材薄层色谱与HPLC指纹图谱识别 [J]. 时珍国医国药，2017， 28（10）：2423-2424.
【关键词】 见血青;苗药;质量标准;薄层色谱
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）3-0044-03
Abstract：Objective To establish the preliminary quality standard for miao national herb Liparis nervosa（Thunb.Ex A.Murray）Lindl. produced in Guizhou province.Methods Trait identification， microscopic identification and TLC were used for qualitative identification of samples.According to the approaches listed in Chinese Pharmacopoeia published in 2015， some testing items including the moisture content， total ash，acid-insoluble ash and extract were established.Results TLC spots were clear， well-separated without interference and had a strong specificity.The moisture， total ash and acid-insoluble ash of samples were no more than 15.0%， 11.0%， 6.0%，respectively;The water-soluble extractives were no less than 10.0%.Conclusion The quality standard is simple， reliable and can provide some experimental data for the quality evaluation of miao national herb Liparis nervosa（Thunb.Ex A.Murray）Lindl.produced in Guizhou.
Keywords：Liparis nervosa Lindl;Miao National Herb;Quality Standard;TLC
見血青为兰科植物见血青Liparis nervosa（Thunb.Ex A.Murray）Lindl.的干燥全草[1]，在夏、秋季节采收，除去杂质，晒干。见血青在《全国中草药汇编》第3版和《中国植物志》第十八卷均有记载[1-2]。文献报道该植物中含有含脉羊耳兰碱、原儿茶酸等成分[3-5]，具有凉血止血、清热解毒的作用，主要用于胃热吐血、肺热咯血、热毒疮疡、蛇咬伤。见血青同时作为贵州省少数民族药材品种，民间中医、民族地区使用广泛，被誉为苗医“止血圣药”，苗族地区常用于治疗刀伤、跌打损伤。作为贵州省民族药材，现无质量标准控制其质量，且目前中国食品药品检定研究院无脉羊耳兰碱对照品和见血青对照药材。因此，本研究以贵州省药检所相关专家鉴定为正品的见血青药材作为见血青对照药材，对黔产苗药见血青药材的性状、显微、薄层、水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物进行测定，并对水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物项目确定了检查限度，初步建立了黔产见血青药材质量标准，为该药材质量评价提供一定的实验数据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 DM2500光学生物显微镜（德国徕卡仪器公司）;DFC500图像分析系统（德国徕卡仪器公司）;AB265-S梅特勒电子天平（梅特勒有限公司）;FW80高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。
1.2 药物与试剂 见血青药材分别采集于贵州各地（详见表1），经贵阳中医学院药学院生药实验室江维克教授鉴定为兰科植物见血青Liparis nervosa（Thunb.Ex A.Murray）Lindl.的干燥全草，凭证标本存放于遵义市食品药品检验所。见血青对照药材（批号：201710-06，贵州省食品药品检验所提供）。石油醚（批号：20170509，天津市科密欧化学试剂有限公司）、乙酸乙酯（批号：20170509，天津市科密欧化学试剂有限公司）、乙醚（批号：20180202，成都金山化学试剂有限公司）、无水乙醇（批号：20180312，天津市科密欧化学试剂有限公司）均为分析纯，硅胶G板（批号：20170818，青岛海洋化工厂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 性状鉴别 依据《药用植物学》[6]对植物根茎叶花果的分类鉴别和《中国药典》[7]2015版对其它药材性状的规范描述，观察12个见血青样品，其性状特征总结如下：根状茎上着生细长的须根数条。假鳞茎圆柱形，长2.5～7.0cm，具节，基部有灰白色膜质叶柄残基。单叶互生，2～5片，黄绿色，质薄，略皱缩;展开后呈卵形或卵椭圆形，长5～16cm，宽2.5～6cm，先端尖，基部成鞘状抱茎，脉3～8条。总状花序顶生，淡紫色，常可见宿存的蒴果;蒴果纺锤形，长0.8～1.5cm，宽0.4～0.6cm。气微，味苦。 2.2 显微鉴别[8] 通过对12个药材样品的粉末进行观察和测量，其显微鉴别特征总结如下：本品粉末棕黄色或棕褐色;厚壁细胞呈不规则形;单细胞非腺毛，壁厚或螺纹状纹理;导管为梯纹导管或网纹导管，直径5～30μm;草酸钙针晶较细，长25～80μm ，多成束存在。如图1所示。
2.3 薄层鉴别[9] 分别取贵州12个产地见血青药材粉末约1.0g，加石油醚（60～90℃）10mL，超声处理30分钟，滤过，水浴蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。另取见血青对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（2015年版《中国药典》四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙醚 （3∶[KG-*3/5]2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。详见图2。
2.4 检查
2.4.1 水分测定水分测定 按2015年版《中国药典》通则0832第二法测定，12批见血青药材水分测定结果为11.03～13.62%，平均值12.51%，暂定水分不得过15.0%。结果详见表2。
2.4.2 总灰测定分灰分测定 按2015年版《中国药典》通则2302测定，12批见血青药材测定结果为8.62～9.66%，平均值9.16%，暂定总灰分不得过11.0%。结果详见表2。
2.4.3 酸不溶性灰分灰分测定 按2015年版《中国药典》通则2302测定， 12批样品测定结果为4.71～5.54%，平均值5.14%，暂定酸不溶性灰分不得过6.0%。结果详见表2。
2.5 水溶性浸出物含量测定浸出物测定 按2015版《中国药典》通则2201冷浸法测定，测定12批样品的结果为12.02～13.56%，平均值12.67%，测定结果详见表2。根据测定结果，暂定浸出物标准不得少于10.0%。
3 讨论
黔产见血青为贵州常用民族药材，本研究对不同产地的黔产见血青药材性状特征、显微特征进行了归纳总结。摸索了TLC条件，分别以石油醚（60～90℃）-乙醚（5∶[KG-*3/5]1）、石油醚（60～90℃）-乙醚-乙酸乙酯 （5∶[KG-*3/5]2∶[KG-*3/5]0.1）、石油醚（60～90℃）-乙醚 （3∶[KG-*3/5]2）为展开剂，展开，作为展开剂，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。其中以石油醚（60～90℃）-乙醚 （3∶[KG-*3/5]2）為展开剂的薄层色谱图斑点明显、荧光斑点清晰、专属性强，并按照国家药典委员会《中药分析方法验证指导原则实施细则》的相关要求进行方法学耐用性考察，重现性好。分别用无水乙醇、80%乙醇、70%乙醇、水作溶剂，采用冷浸法和热浸法依次测定黔产见血青浸出物含量。根据测定结果，以水为溶剂，冷浸法效果最佳，初步确定浸出物限量。按2015年版《中国药典》通则方法对水分、总灰分和酸不溶性灰分进行测定，初步确定各限量标准。
综上所述，本研究能够为黔产苗药见血青药材质量评价提供一定的实验数据。笔者将继续对该药材质量标准深入研究，以规范苗药见血青的生产，促进苗药现代化发展。
参考文献
[1]王国强.全国中草药汇编（第2卷）[M]. 北京：人民卫生出版社，2014：247.
[2]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第18卷）[M]. 北京：科学出版社，1996：71.
[3]赵颖，胡少南 ，王昌华，等. 见血青化学成分研究 [J]. 中草药，2013， 44（21）：2955-2959.
[4]李国平，王珏蓉，郑诗雪，等.见血青总生物碱提取工艺优化 [J]. 武夷学院学报，2016， 35（3）： 1-4.
[5]赵颖，胡少南 ，王昌华，等.兰科植物见血青乙酸乙酯部位化学成分研究 [J]. 中国实验方剂学杂志，2013， 22（19）： 111-113.
[6]姚振声. 药用植物学[M]. 北京：中国中医药出版社，2007.
[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015.
[8]康廷国. 中药鉴定学[M]. 北京：中国中医药出版社，2003.
[9]冯华，石尚友，罗秀琼，等.黔产见血青药材薄层色谱与HPLC指纹图谱识别 [J]. 时珍国医国药，2017， 28（10）：2423-2424.