【摘 要】
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目的:构建一系列含有人前列腺干细胞抗原(PSCA)主要T细胞表位的多拷贝异种化融合基因片段,并分别在人胚肾293T细胞中表达.方法:通过重叠延伸PCR法合成单拷贝异种化PSCA基因片
【机 构】
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军事医学科学院,解放军总医院,武警总医院
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目的:构建一系列含有人前列腺干细胞抗原(PSCA)主要T细胞表位的多拷贝异种化融合基因片段,并分别在人胚肾293T细胞中表达.方法:通过重叠延伸PCR法合成单拷贝异种化PSCA基因片段PSCA1,随即应用同尾酶法将该片段串联形成2、3、4拷贝异种化PSCA基因片段PSCA2、PSCA3和PSCA4,并将上述4种基因片段分别插入真核表达载体pCI-Fc-GPI中,构建最终日的片段1～4拷贝异种化PSCA-Fc-GPI(即PSCA1-Fc-GPI～PSCA4-Fc-GPI),随即分别将重组质粒pCI-PSCA1-Fc-GPI～PSCA4-Fc-GPI体外转染293T细胞,利用间接免疫荧光和流式细胞仪检测其表达情况.结果:测序证实PSCA1片段与设计一致,酶切鉴定证明目的基因片段PSCA1-Fc-GPI～PSCA4-Fc-GPI构建成功;间接免疫荧光和流式细胞仪的检测结果显示,在293T细胞中1～4拷贝异种化PSCA融合基因片段均获得较好表达.结论:构建了目的基因片段PSCA1-Fc-GPI～PSCA4-Fc-GPI,为以PSCA为靶抗原的抗前列腺癌DNA疫苗的构建及功能研究奠定了重要基础.
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