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目的采用RP-HPLC测定人血清中的25-羟维生素D3(25-OH-D3)。方法色谱柱为Aichrombond-AQ C18(250mm×4mm,5μm);流动相为甲醇-水(95∶5),流速1mL·min-1,检测波长265nm,柱温30℃。结果3种浓度的25-OH-D3的提取回收率分别为85.4%±7.9%、81.7%±5.5%、87.9%±6.4%;方法回收率分别为93.5%±7.2%、97.8%±5.9%、100.1%±3.3%;日内、日间RSD分别小于7.7%、9.9%;线性范围为5～120ng·mL-1(r=0.9993)。结论所用方法灵敏度好,可用于25-OH-D3的人体药物动力学研究。