【摘 要】
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以水稻根系cDNA为模板,PCR扩增含His标签的L?1基因开放阅读框,并将该基因克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9k中,PCR及测序验证重组质粒pPIC9k-Lsi1目的基因序列.将验证正确的
【机 构】
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福建农林大学生命科学学院,福建农林大学作物科学学院,福建省农业生态过程与安全监控重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31271670,31300336),教育部博士点基金项目(20133515130001).
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以水稻根系cDNA为模板,PCR扩增含His标签的L?1基因开放阅读框,并将该基因克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9k中,PCR及测序验证重组质粒pPIC9k-Lsi1目的基因序列.将验证正确的重组质粒pPIC9k-Lsi1通过SacI酶切线性化,电转到毕赤酵母GS115感受态细胞中,通过MD/MM板筛选出甲醇利用快型的酵母转化子,再通过不同浓度梯度的G418平板筛选多拷贝转化菌株.提取酵母基因组,PCR验证正确的菌株即为工程菌(GS115/pPIC9k-Lsi1).用1%甲醇诱导该工程菌72h后,收
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