抑制性免疫检查点PD-1或CTLA-4靶向治疗药物已用于肿瘤的临床治疗，但单一靶点药物会有耐药发生，联合使用同时封闭多个靶点可提高疗效，因此拟构建一个可封闭多个靶点的新型重组蛋白。首先设计并合成了一个由人类PD-1和CTLA-4两个受体的胞外功能域组成并且C端带6×His标签的分泌型重组融合蛋白rPC编码序列，插入真核细胞表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1，稳定转染HEK293细胞，收集细胞培养上清，以亲和方法纯化重组蛋白rPC，通过实时荧光定量PCR检测多个人类肿瘤细胞系中PD-1配体PD-L1、PD-L2和CTLA-4配体CD80、CD86的表达，以选择相对高表达的细胞，利用细胞免疫荧光染色方法检验rPC与肿瘤细胞的结合能力，并用CCK-8法检测rPC是否对肿瘤细胞的生长有影响。结果表明，重组融合蛋白rPC可由稳定转染表达载体的HEK293细胞表达并分泌，纯化后的rPC可以与PD-1和CTLA-4配体表达相对较高的肺癌细胞NCI-H226结合，并且rPC处理对其生长并无直接影响，与预期一致。成功获得的重组融合蛋白rPC可用于进一步的体内外功能研究，也为今后研发新型多靶点肿瘤免疫治疗蛋白药物打下了坚实的基础。