【摘 要】
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将含烟碱脱氢酶基因重组质粒pBlueScript SK-ndh用限制性内切酶EcoRI、SpeI双酶切,目的基因再亚克隆到非融合表达质粒载体pET-17B,获得重组子质粒pET-17B-ndh,转化大肠杆菌BL
【机 构】
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郑州轻工业学院食品与生物工程学院,红云烟草集团技术中心
【基金项目】
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国家烟草专卖局科技攻关项目“生化技术在烟草工业中的应用”(合同号:110200101039);国家自然科学基金项目“低水分活度环境角质酶协同尼古丁脱氢酶降解尼古丁机理”(20646004)资助
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将含烟碱脱氢酶基因重组质粒pBlueScript SK-ndh用限制性内切酶EcoRI、SpeI双酶切,目的基因再亚克隆到非融合表达质粒载体pET-17B,获得重组子质粒pET-17B-ndh,转化大肠杆菌BL21（DE3）pLYS获得高酶活力表达的工程菌株。即使在不用IPTG诱导情况下,该工程菌也产生较高酶活力的可溶性酶,酶产量比野生菌A.nicotinovorans提高25倍。通过硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤提纯了烟碱脱氢酶,酶被纯化了39.82倍,SDS-PAGE分析得到电泳纯单一条带。该酶活
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