【摘 要】
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目的为了获得具有DNA结合活性的人NF-κB p50和p65蛋白,建立人NF-κB p50和p65蛋白保守结构域的原核表达系统.方法通过PCR法扩增获得人NF-κB p50和p65蛋白保守结构域的cDNA,
【机 构】
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第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室
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目的为了获得具有DNA结合活性的人NF-κB p50和p65蛋白,建立人NF-κB p50和p65蛋白保守结构域的原核表达系统.方法通过PCR法扩增获得人NF-κB p50和p65蛋白保守结构域的cDNA,后分别将其克隆到原核表达载体pET-22b(+)上,转化E.coli BL-21,经诱导表达及包涵体的变性和复性处理,获得可溶性p50和p65,同时用Western-Blot鉴定NF-κB p50和p65蛋白的表达,EMSA实验检测NF-κB p50和p65蛋白的DNA结合活性.结果构建了pET-22b/p50和pET-22b/p65原核表达质粒;p50、p65蛋白在大肠杆菌中的表达均为包涵体;变性、复性后得到了可溶性p50和p65蛋白,浓度达218 μg/ml和158 μg/ml;并证实可溶性p50和p65蛋白均具有DNA结合活性.结论成功建立了pET-22b/p50和pET-22b/p65原核表达系统,获得了具有DNA结合活性的NF-κB p50和p65蛋白.
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