【摘 要】
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目的 评估以甲胎蛋白（AFP）-MHC复合物为靶向的CAR T细胞治疗肝癌的效果。方法 使用EasySep人类T细胞分离试剂盒分离T细胞。双特异性抗体ET1402L1设计成包含CD28/CD3共刺激域的第二代CAR,将CAR构建体克隆到慢病毒载体中，转导原代人T细胞。通过HepG2细胞构建小鼠异种肝癌肿瘤模型。将细胞分为HepG2组和AFP-CAR T细胞组，小鼠分为肿瘤模型组20只和AFP-CA
【基金项目】
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江苏省卫健委指导性项目（WZ202003）；
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目的 评估以甲胎蛋白（AFP）-MHC复合物为靶向的CAR T细胞治疗肝癌的效果。方法 使用EasySep人类T细胞分离试剂盒分离T细胞。双特异性抗体ET1402L1设计成包含CD28/CD3共刺激域的第二代CAR,将CAR构建体克隆到慢病毒载体中，转导原代人T细胞。通过HepG2细胞构建小鼠异种肝癌肿瘤模型。将细胞分为HepG2组和AFP-CAR T细胞组，小鼠分为肿瘤模型组20只和AFP-CAR T靶向治疗组20只。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖。通过细胞LDH释放测定法测量T细胞毒性。PCR检测细胞因子TNFα、IFNγ、IL2和IL10的mRNA表达。ELISA分析肿瘤小鼠AFP水平。采用碘海醇对小鼠脏器组织造影成像。结果 第1天两组细胞增殖比较没有差异（P＞0.05）,第3、5和7天，AFP-CAR T细胞组细胞增殖较HepG2组降低（P＜0.05）。HepG2组细胞裂解率为（8.24±2.33）%,AFP-CAR T细胞组细胞裂解率为（72.19±8.32）%（P＜0.05）。AFP-CAR T细胞组TNFα、IFNγ、IL-2和IL-10 mRNA分别为1.95±0.17、2.01±0.19、1.96±0.16、1.99±0.18,HepG2组分别为1.04±0.02、1.13±0.06、1.07±0.05、1.03±0.04（P＜0.05）。第0天两组小鼠肿瘤大小比较差异无统计学意义（P＞0.05）,第10、20、30、40天，AFP-CAR T靶向治疗组肿瘤大小较肿瘤模型组减小（P＜0.05）。肿瘤模型组AFP水平为（2564.18±265.19）μg/mL,AFP-CAR T靶向治疗组为（837.49±63.22）μg/mL（P＜0.05）。结论 以AFP-MHC复合物为靶向的CAR-T细胞靶向细胞内分泌的肿瘤抗原产物是可行有效的。
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