【摘 要】
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目的:获得重组人心型脂肪酸结合蛋白,分析其活性及制备冻干品。方法:从GenBank中检索人源H-FABP CDs序列,合成基因后构建原核表达载体pET-28a(+)-H-FABP。将表达载体转入E.co
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目的:获得重组人心型脂肪酸结合蛋白,分析其活性及制备冻干品。方法:从GenBank中检索人源H-FABP CDs序列,合成基因后构建原核表达载体pET-28a(+)-H-FABP。将表达载体转入E.coli BL21(DE3),摸索pET-28a(+)-H-FABP最佳诱导条件,表达并纯化重组蛋白。使用检测试剂检测纯化后的重组H-FABP活性,研究最佳冻干方案并考察冻干品的稳定性。结果:经过优化诱导条件,重组H-FABP在BL21(DE3)中以可溶性蛋白形式表达。诱导条件为OD600≈0.6,IPTG终浓度0.4mmol/L,30℃诱导4h。通过Ni2+亲和层析纯化可得到纯度大于95%的重组HFABP蛋白。重组H-FABP冻干品可以在37℃稳定保存12d,25℃、4℃稳定保存至少4个月。结论:本项研究中的重组H-FABP表达体系成熟、蛋白活性高,冻干品稳定性好,为后续研究提供了稳定高效的生物原材料。
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