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【目的】确定牛精子原位杂交DTT去凝集处理的优化浓度及时间。【方法】牛精子解冻后经密度梯度离心优选并制片,采用05、、10、20、40、80和100 mmol/L六个DTT浓度以及15、304、5和60 min 4个时间段的28个组合进行去凝集处理,Motic Images Advanced 3.2软件测量精子解聚后头部面积。【结果】40 mmol/L DTT处理45 min精子头部面积为（52.32±4.68）μm2,浓度〈40 mmol/L的16个处理组及浓度≥40 mmol/L、处理时间〈