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皮肤移植模型是一个监测T淋巴细胞反应快速和简便的方法，是探讨免疫排斥反应及鉴定近交系小鼠的基本方法之一，较其他器官移植更便于观察移植物的存活。根据移植皮片的来源不同，常用的小鼠皮肤移植方法有背-背法、耳-背法、尾-背法等[3]。不同的来源的皮肤有其不同的优缺点，在参考相关文献基础上，我们建立了小鼠尾部来源皮片进行背部移植的方法。
材料与方法
一、实验材料
1.实验动物：昆明小鼠18只。8～12周龄，雄性，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。
2.器材和药品：显微镊，齿状镊，剪刀，培养皿，刀片，创可贴，棉签，生理盐水，10 g/L戊巴比妥，体积分数为75%乙醇，络合碘，医用生物蛋白胶，医用脱脂纱布，灭菌医用棉签。
二、实验方法
1.麻醉：腹腔注射10 g/L戊巴比妥（0.1 ml/10 g）麻醉小鼠，观察5min，待麻醉生效后再操作。
2.获取尾部皮肤：以体积分数为75%乙醇和络合碘分别消毒小鼠尾部，用刀片进行断尾，断尾长度可以根据所需皮肤多少进行调整，一般在中部或尾部1/3处。左手用齿状镊固定断尾端，右手持刀片从两根尾静脉之间划开皮肤，暴露出皮下白色肌腱。用弯镊将断尾端皮肤从切口处拨开，齿状镊固定尾骨，弯镊夹紧皮肤剥下。将剥下的皮肤放入盛有无菌生理盐水的小皿中，小皿置于冰上，组织面朝下，剪下0.5 X 1.0 cm2 皮肤待用。
3. 皮肤移植：将进行自体移植的小鼠背部朝上，确定移植床部位。移植床大多选择胸部背侧或两侧，该部位有肋骨支撑，血液循环丰富，利于存活，且胸廓可限制术后包扎的力度。将确定移植床部位的毛发用75%乙醇湿润，用新刀片将移植床部位剥皮，络合碘消毒后，齿状镊夹住皮肤，剪下略大于0.5 X 1.0 cm2的皮肤，即为移植床。取供者皮片，轻放在移植床上（组织面朝下），剪去除多余皮片，使其平整地覆盖在移植床上。用1ml注射器针头轻挑医用生物蛋白胶，轻轻点在皮肤接缝处表面位置，切忌蛋白胶不可完全渗透入接缝处，避免蛋白胶将供体与受体皮肤隔离，影响血管和神经重建。无菌创可贴加压包扎，敷贴面紧贴移植处，力度以不影响正常呼吸为宜。同时用医用胶布在创口贴贴合处再绑一圈。术后将受者放置在清洁笼内用灯光照射，待其清醒后放入饲养间。
4.去除包扎及术后观察：术后第6天，麻醉受者（方法同上），去除包扎;将小鼠放在清洁笼内，每8 h观察移植情况，之后逐日观察变化情况。若去除包扎后移植皮片结痂收缩，为技术失败。
5.排斥反应的判定：当移植皮片坏死达80%可视为排斥;同种移植的移植物完全被排斥发生在术后8～10 d;术后观察100 d，未出现排斥现象可认为耐受。
结 果
一、移植皮肤生长情况
本实验共完成皮肤移植18只，12只进行同体移植，6只进行同种异体移植。术后第6天，同体移植皮片生长良好，平整覆盖于移植床，1周后表面出现角化层，3周后角化层脱落，表面光滑，4周后皮肤毛发、血管生长并愈合完整，恢复其尾部皮肤特性，连续观察100 d，无异常。异体移植皮片于术后1周开始出现水肿结痂，约8～10 d坏死达80%，随后脱落。
二、小鼠手术移植结果判定
小鼠同体移植组12只，除1只自身撕咬导致失败外，其余供体皮片与受体皮肤吻合，供血和毛发生长正常，成功率为91.67%。 同种异体移植组6只小鼠皮片均坏死脱落。经过统计学分析，同体移植皮片和同种异体移植皮片存活率的差异有统计学意义（P<0.01）。
表1 两组小鼠皮肤移植术后效果评价
表2 两组小鼠手术移植结果判定
讨论
同种皮肤移植实验有着广泛应用价值，能够用于检测不同免疫抑制药物的有效性，不同诱导免疫耐受方案的可行性，还能够检测不同抗体的生物学效应[1，2]。本实验的目的在于建立一种简便快捷的小鼠皮肤移植模型—尾-背皮肤移植法。皮肤移植的传统方法是从小鼠背部获取皮片，即小鼠背-背皮肤移植法，但在实验过程中发现该方法操作复杂，需要将皮下组织去除，花费时间较长，术后需要缝合可能对皮片造成人为创伤，有一定技术要求。且获得的背部皮片易收缩，术后无论是皮片外观，还是存活时间均不满意。Jame等的研究发现小鼠耳部皮片及尾部皮片移植后存活率较背部皮片长。耳-背皮肤移植法操作简单，但耳部皮肤移植后不会重新长出毛发，而尾-背皮肤移植后，移植成功不仅能够重建血管和神经，其毛发仍能重新生长，更容易判断移植后存活情况[4]。且小鼠耳朵数量有限，一只小鼠只能提供两块皮肤，但尾部皮肤可以移植3-4块皮肤。虽然背-背皮肤移植法能够在一只小鼠背部获得约15块皮片，但该移植法大多数需要处死小鼠，而尾-背皮肤移植法不需要处死小鼠，这样不仅可以做同种移植还可以做同体移植，利用同体移植实验练习手法，通过术后观察能够检测手术技术，防止因手术失败带来误差。
皮肤移植创口的包扎方法有玻璃套管法[5]和创可贴法[6]，但许多文献对两种方法的效果评价不一。因为移植面上的血凝块会影响移植皮片紧贴植面，易导致皮片发炎和脱落。因此在手术过程中应尽量避免出血，如果在创面上留有血污必须用生理盐水冲洗干净，用无菌医用纱布吸干[7]。小鼠尾-背皮肤移植采用创可贴法固定较方便，半分钟内即可完成，能有效避免出血，还具有固定和抗炎双重作用[9]。文献报道的皮肤移植中，多采用皮片四角缝合法缝合移植皮肤来保证供体皮肤不脱落，但是这种方法不仅费时，完成移植需要40min以上，且极易造成损伤，在缝合时可能引起出血，影响手术进度和皮片存活，还可能造成供体皮片卷缩，干扰实验结果的观察[8]。而不缝合用创可贴固定，皮片易移位，利用生物蛋白胶将供体皮肤与受体移植床固定后再包扎很少发生移位。本实验介绍的尾-背移植法具有方法简单损伤小、易观察的特点，具有推广价值。
参考文献：
1. Ulusal BG，Ulusal AE，Wei FC，et al.Allograft mass as a possible contributing factor to the skin transplant outcome.J Surg Res，2010，161（2）：321-327.
2. Rosenberg As，Singer A. Cellular basis of skin allograft rejection：an in vivo model of immune-mediated tissue destruction[J]. Annu Rev lmmunol， 1992 ，10：333-358.
3. Steinmuller D. Skin grafting[J]. Methods Enzymol，1984，108：20-28.
4. Billillgham RE，Medawar PB. The technique of free skin grafting in mammals[J]. J Exp Biol，1951，28（4）：385.
5. 孙敬方. 动物实验方法学[M].北京： 人民卫生出版社，2001：398-401.
6. 刘振红，张长品，张勇等. 小鼠皮片移植的研究[J].首都医药，2003，10（ 16） ：37-38.
7. 张青峰，李文宇，李官成等.一种简易小鼠尾部皮肤移植教学实验改良方法的建立[J].四川动物，2008，27（ 1） ：154-160.
8. Matsuo S， Kurisaki A，Sugino H，et al. Analysis of skin graft survival using green fluorescent protein transgenic mice [J]. J Med Invest，2007，54（3-4）：267-275.
9. 王琼，严秀蕊，王立斌等. 裸小鼠皮肤移植模型的构建及其效果评价.宁夏医科大学学报[J]，2013，35（1）：110-112.
材料与方法
一、实验材料
1.实验动物：昆明小鼠18只。8～12周龄，雄性，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。
2.器材和药品：显微镊，齿状镊，剪刀，培养皿，刀片，创可贴，棉签，生理盐水，10 g/L戊巴比妥，体积分数为75%乙醇，络合碘，医用生物蛋白胶，医用脱脂纱布，灭菌医用棉签。
二、实验方法
1.麻醉：腹腔注射10 g/L戊巴比妥（0.1 ml/10 g）麻醉小鼠，观察5min，待麻醉生效后再操作。
2.获取尾部皮肤：以体积分数为75%乙醇和络合碘分别消毒小鼠尾部，用刀片进行断尾，断尾长度可以根据所需皮肤多少进行调整，一般在中部或尾部1/3处。左手用齿状镊固定断尾端，右手持刀片从两根尾静脉之间划开皮肤，暴露出皮下白色肌腱。用弯镊将断尾端皮肤从切口处拨开，齿状镊固定尾骨，弯镊夹紧皮肤剥下。将剥下的皮肤放入盛有无菌生理盐水的小皿中，小皿置于冰上，组织面朝下，剪下0.5 X 1.0 cm2 皮肤待用。
3. 皮肤移植：将进行自体移植的小鼠背部朝上，确定移植床部位。移植床大多选择胸部背侧或两侧，该部位有肋骨支撑，血液循环丰富，利于存活，且胸廓可限制术后包扎的力度。将确定移植床部位的毛发用75%乙醇湿润，用新刀片将移植床部位剥皮，络合碘消毒后，齿状镊夹住皮肤，剪下略大于0.5 X 1.0 cm2的皮肤，即为移植床。取供者皮片，轻放在移植床上（组织面朝下），剪去除多余皮片，使其平整地覆盖在移植床上。用1ml注射器针头轻挑医用生物蛋白胶，轻轻点在皮肤接缝处表面位置，切忌蛋白胶不可完全渗透入接缝处，避免蛋白胶将供体与受体皮肤隔离，影响血管和神经重建。无菌创可贴加压包扎，敷贴面紧贴移植处，力度以不影响正常呼吸为宜。同时用医用胶布在创口贴贴合处再绑一圈。术后将受者放置在清洁笼内用灯光照射，待其清醒后放入饲养间。
4.去除包扎及术后观察：术后第6天，麻醉受者（方法同上），去除包扎;将小鼠放在清洁笼内，每8 h观察移植情况，之后逐日观察变化情况。若去除包扎后移植皮片结痂收缩，为技术失败。
5.排斥反应的判定：当移植皮片坏死达80%可视为排斥;同种移植的移植物完全被排斥发生在术后8～10 d;术后观察100 d，未出现排斥现象可认为耐受。
结 果
一、移植皮肤生长情况
本实验共完成皮肤移植18只，12只进行同体移植，6只进行同种异体移植。术后第6天，同体移植皮片生长良好，平整覆盖于移植床，1周后表面出现角化层，3周后角化层脱落，表面光滑，4周后皮肤毛发、血管生长并愈合完整，恢复其尾部皮肤特性，连续观察100 d，无异常。异体移植皮片于术后1周开始出现水肿结痂，约8～10 d坏死达80%，随后脱落。
二、小鼠手术移植结果判定
小鼠同体移植组12只，除1只自身撕咬导致失败外，其余供体皮片与受体皮肤吻合，供血和毛发生长正常，成功率为91.67%。 同种异体移植组6只小鼠皮片均坏死脱落。经过统计学分析，同体移植皮片和同种异体移植皮片存活率的差异有统计学意义（P<0.01）。
表1 两组小鼠皮肤移植术后效果评价
表2 两组小鼠手术移植结果判定
讨论
同种皮肤移植实验有着广泛应用价值，能够用于检测不同免疫抑制药物的有效性，不同诱导免疫耐受方案的可行性，还能够检测不同抗体的生物学效应[1，2]。本实验的目的在于建立一种简便快捷的小鼠皮肤移植模型—尾-背皮肤移植法。皮肤移植的传统方法是从小鼠背部获取皮片，即小鼠背-背皮肤移植法，但在实验过程中发现该方法操作复杂，需要将皮下组织去除，花费时间较长，术后需要缝合可能对皮片造成人为创伤，有一定技术要求。且获得的背部皮片易收缩，术后无论是皮片外观，还是存活时间均不满意。Jame等的研究发现小鼠耳部皮片及尾部皮片移植后存活率较背部皮片长。耳-背皮肤移植法操作简单，但耳部皮肤移植后不会重新长出毛发，而尾-背皮肤移植后，移植成功不仅能够重建血管和神经，其毛发仍能重新生长，更容易判断移植后存活情况[4]。且小鼠耳朵数量有限，一只小鼠只能提供两块皮肤，但尾部皮肤可以移植3-4块皮肤。虽然背-背皮肤移植法能够在一只小鼠背部获得约15块皮片，但该移植法大多数需要处死小鼠，而尾-背皮肤移植法不需要处死小鼠，这样不仅可以做同种移植还可以做同体移植，利用同体移植实验练习手法，通过术后观察能够检测手术技术，防止因手术失败带来误差。
皮肤移植创口的包扎方法有玻璃套管法[5]和创可贴法[6]，但许多文献对两种方法的效果评价不一。因为移植面上的血凝块会影响移植皮片紧贴植面，易导致皮片发炎和脱落。因此在手术过程中应尽量避免出血，如果在创面上留有血污必须用生理盐水冲洗干净，用无菌医用纱布吸干[7]。小鼠尾-背皮肤移植采用创可贴法固定较方便，半分钟内即可完成，能有效避免出血，还具有固定和抗炎双重作用[9]。文献报道的皮肤移植中，多采用皮片四角缝合法缝合移植皮肤来保证供体皮肤不脱落，但是这种方法不仅费时，完成移植需要40min以上，且极易造成损伤，在缝合时可能引起出血，影响手术进度和皮片存活，还可能造成供体皮片卷缩，干扰实验结果的观察[8]。而不缝合用创可贴固定，皮片易移位，利用生物蛋白胶将供体皮肤与受体移植床固定后再包扎很少发生移位。本实验介绍的尾-背移植法具有方法简单损伤小、易观察的特点，具有推广价值。
参考文献：
1. Ulusal BG，Ulusal AE，Wei FC，et al.Allograft mass as a possible contributing factor to the skin transplant outcome.J Surg Res，2010，161（2）：321-327.
2. Rosenberg As，Singer A. Cellular basis of skin allograft rejection：an in vivo model of immune-mediated tissue destruction[J]. Annu Rev lmmunol， 1992 ，10：333-358.
3. Steinmuller D. Skin grafting[J]. Methods Enzymol，1984，108：20-28.
4. Billillgham RE，Medawar PB. The technique of free skin grafting in mammals[J]. J Exp Biol，1951，28（4）：385.
5. 孙敬方. 动物实验方法学[M].北京： 人民卫生出版社，2001：398-401.
6. 刘振红，张长品，张勇等. 小鼠皮片移植的研究[J].首都医药，2003，10（ 16） ：37-38.
7. 张青峰，李文宇，李官成等.一种简易小鼠尾部皮肤移植教学实验改良方法的建立[J].四川动物，2008，27（ 1） ：154-160.
8. Matsuo S， Kurisaki A，Sugino H，et al. Analysis of skin graft survival using green fluorescent protein transgenic mice [J]. J Med Invest，2007，54（3-4）：267-275.
9. 王琼，严秀蕊，王立斌等. 裸小鼠皮肤移植模型的构建及其效果评价.宁夏医科大学学报[J]，2013，35（1）：110-112.