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[摘要] 目的 建立用高效液相色谱法测定尼可刹米注射液含量的方法。方法 选用Eclipse DCB-C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈-水（20∶80）为流动相；流速1.0 mL/min，检测波长263 nm。结果 尼可刹米在0.549～10.980 mg/mL范围内呈良好的线性关系（r=0.9993），平均加样回收率为100.6%（RSD=1.2％，n=6）。结论 本方法准确、重复性好，可用作尼可刹米注射液的质量控制。
[关键词] 尼可刹米注射液；高效液相色谱；含量测定
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2011）21-87-02
Determination the content of Nikethamide injection by HPLC
JIANG Fengwei
Jiaozuo Institute for Food and Drug Control in Henan Province, Jiaozuo 454000,China
[Abstract] Objective To establish a method for determination the content of Nikethamide injection by HPLC. Methods The Eclipse DCB-C18 column(150 mm×4.6 mm,5μm) was used. The mobile phase was acetonitrile-water(20∶80). The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 263 nm．Results The linear range of Nikethamide was 0.549~10.980 mg/mL(r=0.9993).The average recovery was 100.6%(RSD=1.2％,n=6)．Conclusion This method is sensitive and reproducibility,it can be used for quality control of Nikethamide Injection．
[Key words] Nikethamide injection; HPLC; Content determination
尼可刹米注射液为中枢兴奋药，临床上用于中枢性呼吸抑制及各种原因引起的呼吸抑制。为《中国药典》（2010年版）二部所收载，检测方法为分光光度法[1]，文献报道的分析方法有GC[2]、磷光分析[3]。本研究用高效液相色谱法测定注射液中尼可刹米的含量，为控制药品质量，提供一种简单、灵敏、快速准确的检测方法。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪（包括G1322A在线脱气机、G1311A四元泵、G1329A进样器G1314B VWD检测器）；92SM-202A电子天平。尼可刹米原料（天津药业焦作有限公司提供，含量为99.3%）；尼可刹米注射液，规格1.5 mL∶0.375 g（北京市永康药业有限公司，10060224；天津药业焦作有限公司，批号10052322、10071922）；色谱纯乙腈，纯净水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Eclipse DCB-C18（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相[4-5]为乙腈-水（20∶80）；检测波长263 nm，流速1.0 mL/min，柱温30℃，进样量10μL。
2.2 对照品溶液
用天平称取尼可刹米原料0.553 g，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释释至刻度，摇匀；得对照品溶液（5.490 mg/mL）。
2.3 供试品溶液的制备
取供试品5支，混匀。精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液（2.5 mg/mL）。
2.4 空白对照试验
依据该药的处方取辅料适量，按供试品溶液制备方法制备不含尼可刹米的空白对照溶液。分别取对照品溶液10μL、供试品溶液20μL、空白对照溶液10μL进样。
从色谱图上看出，在该色谱条件下，供试品溶液和对照品溶液中均出现相应的尼可刹米色谱峰，而空白对照溶液未见色谱峰，表明空白样品不干扰测定。结果见图1。
图1 尼可刹米的色谱图
a.对照品 b.供试品 c.空白 1.尼可刹米
2.5 线性关系考察
精密量取浓度为5.490 mg/mL的对照液10 mL置100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.549 mg/mL的对照液，分别取浓度为0.553 mg/mL的对照液10μL，20μL，30μL；浓度为 5.490 mg/mL的对照液5μL，10μL，20μL注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=3595.7C-8.6，r=0.9993；表明在浓度为0.549～10.980 mg/mL的范围内进样，样品量与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取供试品溶液（2.5 mg/mL），按上述色谱条件重复进样6次，每次进样10μL，测定峰面积，RSD=0.8％（n=6）。
表1 回收率实验结果（n=6）
取样量（mL） 含尼可刹米（mg） 加入对照品量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%）
5 1.25 1.10 2.35 100.1 100.6 1.2
2.39 103.5
2.36 101.2
2.34 99.5
2.34 99.1
2.35 100.3
2.7 重复性试验
取同一批号样品，照供试品溶液制备方法制作供试品溶液6份，分别测定，测得供试品中尼可刹米的平均含量为100.3%，RSD=1.3％（n=6），表明方法的重复性良好。
2.8 稳定性试验
取供试品溶液，分别于0，3，6，9，12 h进样10 μL，测定峰面积，结果RSD为0.95％（n=5），说明供试品溶液至少在12 h内稳定。
2.9 加样回收率试验
精密量取供试品溶液（2.5 mg/mL）5 mL，置于10 mL容量瓶中；精密量取对照品溶液（5.49 mg/mL）2 mL，加入上述容量瓶中，加水至刻度，混匀。依此法平行制备6份，依次进样，测定含量，结果见表1。
2.10 样品含量测定
分别精取对照品溶液和供试品溶液各10μL注入色谱仪，按外标峰面积法计算尼可刹米含量。见表2。
表2 样品含量测定结果（n=3）
批号 尼可刹米占标示量的比例（%） RSD（%）
10052322 100.3 0.9
10060224 97.1 0.8
10071922 97.3 1.3
3 讨论
取尼可刹米原料适量用流动相溶解，在200～400 nm的波长范围内进行扫描。结果在263 nm处有最大吸收，故选用263 nm为本方法的检测波长。
作者试验过程中，曾比较用乙腈-磷酸盐流动相和乙腈-水流动相，结果显示乙腈-水系统完全可以满足本实验的要求，主峰的峰形较好，考虑到减化操作，故采用乙腈-水系统。
分别用药典方法和本实验方法测定上述10052322、10060224、10071922三个样品，结果药典法分别为99.8%、96.9%、97.0%；本方法分别为100.3%、97.1%、96.9%，显示本方法与药典方法无明显差异，可用于尼可刹米注射液的含量测定。
[参考文献]
[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（二部）[S].2010：224.
[2] 候一斌.尼可刹米及其代谢产物的气相色谱/质谱法检测[J].质谱学报，1992，1（13）：57-60.
[3] 黄如衡，周东，何长清．尼可刹米经犬气道给药后的药物动力学与药效学[J].中国药理学报，1994，15（3）：271.
[4] 徐帆，冯恩富，徐贵丽，等.氨茶碱、多巴胺、尼可刹米注射液配伍稳定性研究[J].中国药业，2009，18（23）：12-14.
[5] 郑希林，吴瑞良.尼可刹米注射液的稳定性考查[J].中国药师，2000，3（6）：380.
（收稿日期：2011-09-23）
[关键词] 尼可刹米注射液；高效液相色谱；含量测定
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2011）21-87-02
Determination the content of Nikethamide injection by HPLC
JIANG Fengwei
Jiaozuo Institute for Food and Drug Control in Henan Province, Jiaozuo 454000,China
[Abstract] Objective To establish a method for determination the content of Nikethamide injection by HPLC. Methods The Eclipse DCB-C18 column(150 mm×4.6 mm,5μm) was used. The mobile phase was acetonitrile-water(20∶80). The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 263 nm．Results The linear range of Nikethamide was 0.549~10.980 mg/mL(r=0.9993).The average recovery was 100.6%(RSD=1.2％,n=6)．Conclusion This method is sensitive and reproducibility,it can be used for quality control of Nikethamide Injection．
[Key words] Nikethamide injection; HPLC; Content determination
尼可刹米注射液为中枢兴奋药，临床上用于中枢性呼吸抑制及各种原因引起的呼吸抑制。为《中国药典》（2010年版）二部所收载，检测方法为分光光度法[1]，文献报道的分析方法有GC[2]、磷光分析[3]。本研究用高效液相色谱法测定注射液中尼可刹米的含量，为控制药品质量，提供一种简单、灵敏、快速准确的检测方法。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪（包括G1322A在线脱气机、G1311A四元泵、G1329A进样器G1314B VWD检测器）；92SM-202A电子天平。尼可刹米原料（天津药业焦作有限公司提供，含量为99.3%）；尼可刹米注射液，规格1.5 mL∶0.375 g（北京市永康药业有限公司，10060224；天津药业焦作有限公司，批号10052322、10071922）；色谱纯乙腈，纯净水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Eclipse DCB-C18（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相[4-5]为乙腈-水（20∶80）；检测波长263 nm，流速1.0 mL/min，柱温30℃，进样量10μL。
2.2 对照品溶液
用天平称取尼可刹米原料0.553 g，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释释至刻度，摇匀；得对照品溶液（5.490 mg/mL）。
2.3 供试品溶液的制备
取供试品5支，混匀。精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液（2.5 mg/mL）。
2.4 空白对照试验
依据该药的处方取辅料适量，按供试品溶液制备方法制备不含尼可刹米的空白对照溶液。分别取对照品溶液10μL、供试品溶液20μL、空白对照溶液10μL进样。
从色谱图上看出，在该色谱条件下，供试品溶液和对照品溶液中均出现相应的尼可刹米色谱峰，而空白对照溶液未见色谱峰，表明空白样品不干扰测定。结果见图1。
图1 尼可刹米的色谱图
a.对照品 b.供试品 c.空白 1.尼可刹米
2.5 线性关系考察
精密量取浓度为5.490 mg/mL的对照液10 mL置100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.549 mg/mL的对照液，分别取浓度为0.553 mg/mL的对照液10μL，20μL，30μL；浓度为 5.490 mg/mL的对照液5μL，10μL，20μL注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=3595.7C-8.6，r=0.9993；表明在浓度为0.549～10.980 mg/mL的范围内进样，样品量与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取供试品溶液（2.5 mg/mL），按上述色谱条件重复进样6次，每次进样10μL，测定峰面积，RSD=0.8％（n=6）。
表1 回收率实验结果（n=6）
取样量（mL） 含尼可刹米（mg） 加入对照品量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%）
5 1.25 1.10 2.35 100.1 100.6 1.2
2.39 103.5
2.36 101.2
2.34 99.5
2.34 99.1
2.35 100.3
2.7 重复性试验
取同一批号样品，照供试品溶液制备方法制作供试品溶液6份，分别测定，测得供试品中尼可刹米的平均含量为100.3%，RSD=1.3％（n=6），表明方法的重复性良好。
2.8 稳定性试验
取供试品溶液，分别于0，3，6，9，12 h进样10 μL，测定峰面积，结果RSD为0.95％（n=5），说明供试品溶液至少在12 h内稳定。
2.9 加样回收率试验
精密量取供试品溶液（2.5 mg/mL）5 mL，置于10 mL容量瓶中；精密量取对照品溶液（5.49 mg/mL）2 mL，加入上述容量瓶中，加水至刻度，混匀。依此法平行制备6份，依次进样，测定含量，结果见表1。
2.10 样品含量测定
分别精取对照品溶液和供试品溶液各10μL注入色谱仪，按外标峰面积法计算尼可刹米含量。见表2。
表2 样品含量测定结果（n=3）
批号 尼可刹米占标示量的比例（%） RSD（%）
10052322 100.3 0.9
10060224 97.1 0.8
10071922 97.3 1.3
3 讨论
取尼可刹米原料适量用流动相溶解，在200～400 nm的波长范围内进行扫描。结果在263 nm处有最大吸收，故选用263 nm为本方法的检测波长。
作者试验过程中，曾比较用乙腈-磷酸盐流动相和乙腈-水流动相，结果显示乙腈-水系统完全可以满足本实验的要求，主峰的峰形较好，考虑到减化操作，故采用乙腈-水系统。
分别用药典方法和本实验方法测定上述10052322、10060224、10071922三个样品，结果药典法分别为99.8%、96.9%、97.0%；本方法分别为100.3%、97.1%、96.9%，显示本方法与药典方法无明显差异，可用于尼可刹米注射液的含量测定。
[参考文献]
[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（二部）[S].2010：224.
[2] 候一斌.尼可刹米及其代谢产物的气相色谱/质谱法检测[J].质谱学报，1992，1（13）：57-60.
[3] 黄如衡，周东，何长清．尼可刹米经犬气道给药后的药物动力学与药效学[J].中国药理学报，1994，15（3）：271.
[4] 徐帆，冯恩富，徐贵丽，等.氨茶碱、多巴胺、尼可刹米注射液配伍稳定性研究[J].中国药业，2009，18（23）：12-14.
[5] 郑希林，吴瑞良.尼可刹米注射液的稳定性考查[J].中国药师，2000，3（6）：380.
（收稿日期：2011-09-23）