探索趋化素样因子1(CKLF1)对AS髋关节韧带成纤维细胞增殖和向成骨细胞转化的影响。
方法正常和AS髋关节韧带组织分别取自我科6例股骨颈骨折和4例重度AS拟行髋关节置换的患者。组织经常规消化得单细胞,并行倒置相差显微镜观察和抗波形蛋白(vimentin)免疫荧光染色(IFC)检测。对上述髋关节韧带组织及成纤维细胞分别行原位(in situ)和体外(in vitro)培养,重组腺相关病毒(rAAV)-lacZ、rAAV-hCKLF1转染21 d后收集标本。细胞增殖、致炎性细胞因子分泌、成骨关键靶基因、CKLF1及CCR4表达等分别采用ELISA、IFC和荧光定量反转录(RT)-PCR检测。各组间数据用单因素方差分析(LSD法),2组间比较采用t检验。
结果第2代正常和AS细胞抗vimentin IFC检测均为阳性,表明分离培养的细胞为成纤维细胞。rAAV-hCKLF1转染21 d后,苏木精-伊红(HE)染色并计数单位面积下的细胞数、水溶性四氮唑法(WST-1)检测细胞增殖能力和Hoechst 33258检测细胞DNA含量均显示,CKLF1转染促进细胞增殖[与无病毒转染组、lacZ组相比,差异具有统计学意义(F=6.98,64.32,115.91;P<0.05或P<0.01)];正常和AS髋关节韧带组织及成纤维细胞分泌的致炎性细胞因子(IL-6和TNF-α),均明显升高[与无病毒转染组、lacZ组相比,差异具有统计学意义(F=34.57,8.89;P<0.05或P<0.01)];此外,与无病毒转染组、lacZ组及正常成纤维细胞的各组相比,CKLF1尚能促进AS成纤维细胞表达特异性骨细胞外基质蛋白[骨桥蛋白(OPN)和骨钙蛋白(OCN)];荧光定量RT-PCR也得到了与上述检测结果相近的发现。
结论过表达CKLF1促进成纤维细胞增殖和致炎性细胞因子分泌,增强成骨相关靶基因的转录,推测CKLF1可能在AS关节病理性骨化过程中发挥重要作用。