【摘 要】
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该研究主要针对大质粒转染人源心室肌Ac16细胞的方式及最适条件进行摸索.采用人源心室肌Ac16细胞作为研究模型,分别用Lip3000转染、核酸脂质体(Hieff TransTM Liposomal)转染和慢病毒转染三种方法将外源大质粒pLenti-CasRx-EGFP导入Ac16细胞中,通过统计表达绿色荧光蛋白的阳性细胞比例,分析外源基因的转染效率,探索大质粒pLenti-CasRx-EGFP的最佳转染方式和转染条件.结果 表明,Lip3000转染Ac16细胞的最适转染条件为:质粒与Lip3000的比例为
【机 构】
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中国医学科学院,北京协和医学院,国家心血管疾病中心,阜外医院,动物实验中心,心血管植入材料临床前研究评价北京市重点实验室,北京102300
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该研究主要针对大质粒转染人源心室肌Ac16细胞的方式及最适条件进行摸索.采用人源心室肌Ac16细胞作为研究模型,分别用Lip3000转染、核酸脂质体(Hieff TransTM Liposomal)转染和慢病毒转染三种方法将外源大质粒pLenti-CasRx-EGFP导入Ac16细胞中,通过统计表达绿色荧光蛋白的阳性细胞比例,分析外源基因的转染效率,探索大质粒pLenti-CasRx-EGFP的最佳转染方式和转染条件.结果 表明,Lip3000转染Ac16细胞的最适转染条件为:质粒与Lip3000的比例为1∶2;核酸脂质体转染Ac16细胞的最适条件为:质粒与脂质体的比例为1∶3;慢病毒感染Ac16细胞的最适MOI值为200;通过比较三种转染方式的转染效率发现慢病毒的转染效率最高.最后得出大于10Kb的大型质粒(Lenti-CasRx-E FP)转染人源心室肌Ac16细胞最适合的方式是利用慢病毒转染,最佳MOI值为200.
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