观察叔丁基对苯二酚(tBHQ)对高糖环境下视网膜Müller细胞中核因子E2相关因子2 (Nrf2)、血红素氧合酶1 (HO-1)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)的表达影响;初步探讨tBHQ的抗氧化及抗凋亡作用。
方法大鼠视网膜Müller细胞分为正常糖组(5.5 mmol/L)(N组)、高糖组(45.0 mmol/L )(HG组)、tBHQ干预组(HG+tBHQ组)。HG+tBHQ组Müller细胞培养48 h后,加入tBHQ 20 μmol/L预处理剂诱导Nrf2和HO-1的表达。免疫荧光染色法鉴定Müller细胞;蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应检测各组Müller细胞中Nrf2、HO-1、PI3K、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)、Bax蛋白和基因的表达;流式细胞仪检测各组Müller细胞的凋亡。
结果培养的Müller细胞细胞体大,细胞浆丰富;细胞核呈圆形或卵圆形,边界清晰。HG组Müller细胞中Nrf2 (t=4.114)、HO-1 (t=9.275)蛋白表达较N组升高,差异有统计学意义(P=0.006、0.000)。HG+tBHQ组Müller细胞中Nrf2 (t=7.847)、HO-1 (t=7.947)、PI3K (t=5.397)、Bcl-2(t=6.825)蛋白表达较HG组升高,差异有统计学意义(P=0.000、0.000、0.002、0.000);Bax蛋白表达较HG组降低,差异有统计学意义(t=14.998、P=0.000)。HG组Müller细胞中Nrf2 (t=7.292)、HO-1(t=15.014)mRNA较N组升高,差异有统计学意义(P=0.000、0.000)。HG+tBHQ组Müller细胞中Nrf2 (t=18.046)、HO-1 (t=39.458)、PI3K (t=4.979)、Bcl-2(t=9.535) mRNA较HG组升高,差异有统计学意义(P=0.000、0.000、0.003、0.000);Bax mRNA较HG组降低,差异有统计学意义(t=16.520、P=0.000)。HG组Müller细胞凋亡率较N组增高,差异有统计学意义(t=39.905、P=0.000);HG+tBHQ组Müller细胞凋亡率较HG组降低,差异有统计学意义(t=21.083、P=0.000 )。
结论tBHQ通过上调视网膜Müller细胞中Nrf2、HO-1、PI3K的表达,抑制Müller细胞的凋亡。