【摘 要】
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目的:探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)在肺腺癌(LUAD)中的临床意义及对LUAD细胞增殖、凋亡和p16INK4a/RB通路的影响.方法:通过UALCAN、K-M数据库分析CHD5在LUAD中表达情况及其与预后的关系;通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测LUAD组织、癌旁组织和各细胞系(H1299、H1650、H1975、A549)及正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)中CHD5的表达情况;免疫组化染色检测LUAD组织中CHD5的表
【机 构】
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河北省胸科医院胸外科,河北石家庄050001;河北医科大学第四医院胸外科,河北石家庄050001
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目的:探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白5(CHD5)在肺腺癌(LUAD)中的临床意义及对LUAD细胞增殖、凋亡和p16INK4a/RB通路的影响.方法:通过UALCAN、K-M数据库分析CHD5在LUAD中表达情况及其与预后的关系;通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测LUAD组织、癌旁组织和各细胞系(H1299、H1650、H1975、A549)及正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)中CHD5的表达情况;免疫组化染色检测LUAD组织中CHD5的表达情况,并分析其与患者临床病理特征及预后的关系.CHD5基因的sgRNA载体感染H1975和A549细胞作为过表达组(CHD5-OE组),同时设置空载体感染细胞为阴性对照组(Ctrl-OE组)、未感染病毒细胞为空白组(NC组),并通过CCK-8实验、克隆形成实验、TUNEL凋亡实验、细胞划痕和Transwell实验,评估CHD5表达上调对LUAD细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响,Western blotting实验检测CHD5表达上调对p16INK4a/RB介导的信号通路和细胞周期蛋白表达情况的影响.结果:生物信息数据库分析显示CHD5在LUAD中显著低表达,且CHD5低表达与更差的总生存时间(OS)显著相关;qRT-PCR和Western blotting检测发现,CHD5在LUAD组织和癌细胞(H1299、H1650、H1975、A549)中表达水平均显著低于癌旁组织和正常肺上皮细胞系BEAS-2B,差异具有统计学意义(P＜0.05);免疫组化结果显示,65.7％的LUAD组织样本中CHD5呈低表达或不表达,与临床分期、肿瘤直径及淋巴结转移显著相关,与年龄、性别、吸烟及远处转移无关;CHD5低表达的患者无进展生存期(PFS)更短;Cox多因素分析显示CHD5表达可作为LUAD患者预后影响因素(P ＜0.001).CHD5过表达明显抑制体外细胞增殖、迁移和侵袭;CyclinD1、CDK4、p-RB、MMP-9的表达水平降低,caspase-9、p16、RB的表达水平升高;结论:CHD5在LUAD中表达下调且与患者的不良预后相关,CHD5过表达可抑制LUAD细胞增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与抑制p16INK4a/RB信号通路活化有关.
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