【摘 要】
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目的：利用CRISPR/Cas系统在XRCC6基因5′端插入Flag标签序列,筛选XRCC6-Flag稳定表达的宫颈癌细胞（He La）株。方法：根据Gen Bank中XRCC6基因序列,设计XRCC6基因敲入的g RNA序列,
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,安徽医科大学研究生学院
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划（2012AA022501）,国家重点基础研究发展计划（2013CB910801）,国家自然科学基金（31270836,31370760）
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目的：利用CRISPR/Cas系统在XRCC6基因5′端插入Flag标签序列,筛选XRCC6-Flag稳定表达的宫颈癌细胞（He La）株。方法：根据Gen Bank中XRCC6基因序列,设计XRCC6基因敲入的g RNA序列,构建入p Cas-Guide载体中,获得p Cas-XRCC6载体;设计XRCC6基因的同源臂序列,利用搭桥PCR方法将同源臂和Flag标签序列作为模板进行扩增,得到供体DNA片段,并将其克隆到p Back Zero-T表达载体上,获得p XRCC6-Donor载体;将上述2个载体
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