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摘要 [目的]探讨膨化炮制对半夏多糖含量的影响。[方法]采用苯酚-硫酸法，对半夏生品及膨化品多糖含量进行测定，采用单因素试验法优化提取条件。[结果]试验测出，半夏生品的多糖含量为12.88%，经膨化炮制后，半夏多糖含量升高，为14.55%。[结论]膨化法可显著提高半夏多糖的含量。
关键词 半夏；膨化；多糖；苯酚-硫酸法
中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）12-195-02
Abstract [Objective] To investigate the impact of puffing concocted pinellia polysaccharide content.[Method] Using phenolsulfuric acid method，polysaccharide content of pinellia raw goods and puffed products were determined，extraction condition was optimized by using single factor experiment method.[Result] The results showed that polysaccharide content of pinellia raw goods is 12.88%.After the puffed unprocessed，pinellia tuber polysaccharides content increases to 14.55%.[Conclusion] Puffing method can significantly increase the content of pinellia tuber polysaccharides.
Key words Pinellia tuber； Puffed； Polysaccharide； Phenolsulfuric acid method
膨化技术[1]是一个广泛应用于食品行业的加工技术，它的原理是通过旋转螺杆的剪切、挤压及摩擦升温，膨化腔内产生高温高压后压力骤降至常温常压，原料中的水分骤然汽化做功，达到膨化的目的。已有人将此技术用于中药的炮制[2-3]，但对半夏的膨化还未见相关报道。多糖为半夏的另一有效成分，研究表明，半夏多糖具有抗肿瘤的作用[4]。笔者采用PH42型谷物膨化机，对半夏进行膨化，用苯酚-硫酸法[5]测定多糖含量，并与半夏饮片进行比较。
1 材料与方法
1.1 材料
供试药材：半夏药材购于成都荷花池药材市场，经西南交通大学王盛民教授鉴定为天南星科植物半夏[Pinellia ternata（Thunb.）Breit.]的块茎。
主要仪器：BSA224S电子天平，赛多利斯科学仪器北京有限公司；UV2450紫外分光光度计，苏州市莱顿科学仪器有限公司；恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；高速冷冻离心机，德国HERMIE公司Z323K。主要试剂：D葡萄糖对照品，购于中国药品生物制品检定所，批号110833200904。
1.2 方法
1.2.1 对照品溶液的制备。
精密称取105 ℃干燥至恒重的D无水葡萄糖对照品6.5 mg，置100 ml量瓶中，加纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
1.2.2 测定波长的选择。分别将半夏供试品和对照品液显色后，以空白试剂为对照，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录VA），在400～ 600 nm波长处进行光谱扫描，结果供试品和对照品液在486 nm处都有最大吸收，故选择486 nm作为测定波长。
1.2.3 显色条件的考察。影响显色的因素主要有水浴温度、水浴时间、苯酚浓度，试验对各影响因素进行考察。
1.2.3.1 水浴时间的考察。
精密吸取对照品溶液1.2 ml于试管中，加蒸馏水至2.0 ml，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温不同时间，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值，考察水浴时间对显色的影响。
1.2.3.2 水浴温度的考察。
精密吸取对照品溶液1.2 ml于试管中，方法同“1.2.3.1”，于不同温度水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以空白试剂为对照，在486 nm波长处测定吸光度值，考察水浴温度对显色的影响。
1.2.3.3 苯酚浓度的考察。
精密吸取对照品溶液1.2 ml于试管中，加蒸馏水至2.0 ml，分别精密加入不同浓度的苯酚10 ml，混匀，其余方法同“1.2.3.1”，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值，考察苯酚浓度对显色的影响。
1.2.3.4 供试品提取时间的考察。
精密称取半夏粗粉8份，每份1.0 g，置圆底烧瓶中，加水100 ml，称定重量，加热回流1.0、1.5、2.0、2.5 h，冷却，称重，补足重量，用脱脂棉滤过，精密吸取续滤液2.0 ml，加乙醇10.0 ml，摇匀，静置12 h，离心[4]，取沉淀加水溶解，置50 ml容量瓶中，稀释至刻度。精密吸取2.0 ml于试管中，立即加入5%苯酚溶液 1.0 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值，计算其含量，考察供试品提取时间对显色的影响。
1.2.4 供试品制备方法确定。 精密称取半夏粗粉l .0 g，置圆底烧瓶中，加水100 ml，称定重量，加热回流1.5 h，冷却，称重，补足重量，用脱脂棉滤过，精密吸取续滤液2.0 ml，加乙醇100 ml，摇匀，静置12 h，离心，取沉淀加水溶解，置50 ml容量瓶中，稀释至刻度。精密量取2.0 ml于试管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值。
1.2.5 标准曲线的制备。
精密吸取葡萄糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，分别加水至2.0 ml，立即加入5% 的苯酚10 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值，以吸光度（A）为纵坐标，浓度（mg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。
1.2.6 方法学考察。对仪器精密度、样品稳定性、试验重复性进行考察，并计算样品的加样回收率。
2 结果与分析
2.1 水浴时间的考察 由图1可见，水浴时间为30 min时测得的吸光度值最高，故选择30 min为试验的最佳的水浴时间。
2.2 水浴温度的考察
由图2可知，水浴温度40 ℃测得的吸光度值最高，故选择40 ℃为试验的最佳水浴温度。
2.3 苯酚浓度的考察 由图3可知，加入5%苯酚和6%苯酚测得的吸光度值接近，但由于6%苯酚在水中溶解不充分，为保证测量的准确性，选择5%苯酚浓度最佳。
2.4 供试品提取时间的考察
由图4可知，提取1.5 h和20 h含量差别较小，但考虑到节约资源，选择1.5 h为最佳提取时间。
2.5 标准曲线的制备
按照“1.2.5”绘得标准曲线，得回归方程为y=12.582x+0.016 1，R2=0.999 2 （n=6），表明葡萄糖对照品在0.013 ～ 0.065 mg范围内呈良好的线性关系。
2.6 方法学考察
2.6.1 精密度考察。精密吸取对照品溶液各10 ml于6个试管中，按“1.2”项下的方法制备供试品和对照品，在486 nm波长处测定吸光度值，重复6次，结果RSD值为1.02%，表明仪器精度性良好。
2.6.2 稳定性考察。
精密吸取供试品溶液2.0 ml于试管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在0、30、60、120、180、240 min时测定吸光度值，结果RSD值为1.48%，表明供试品稳定性良好。
2.6.3 重复性考察。
取同一批半夏粗粉1.0 g，共6份，精密称定，按“1.2”项下方法制备供试品和对照品，在486 nm波长处测定吸光度值，重复6次，结果RSD值为1.16%，表明重复性良好。
2.6.4 加样回收率考察。
取同一批半夏粗粉约0.5 g，共6份（已知多糖含量为12.89%），分别精密加入葡萄糖对照品溶液1.0 ml（浓度为0.065 mg/ml），照“1.2”项下方法制备供试品和对照品，在486 nm波长处测定其吸光度值，计算含量，结果见表1。
加样回收试验结果表明，平均回收率为98.17%，RSD为1.02%，表明多糖回收率符合要求。
2.7 半夏膨化前后多糖含量测定
分别取半夏供试品1.0 g，各3份，精密称定，按“2.4”项下方法制备供试品和对照品，在486 nm波长处测定其吸光度值，计算半夏生品及膨化品的多糖含量，结果得出半夏生品中多糖含量为12.88%，膨化半夏中多糖含量为14.55%，由此可知，膨化半夏的多糖含量高于半夏饮片。
3 讨论
该试验采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，并对各影响因素做了考察，确定了最佳提取条件，试验方法简便、快捷，测定结果准确，可用于半夏多糖含量的分析。
中药材有效成分的提取工艺关系着中药材的利用率及提取物的药理活性，半夏的药用部位为块茎，质地致密坚硬，其有效成分不易提取。半夏膨化炮制后，成为空心网状结构的膨松体，硬度显著降低，同时内部结构改变，淀粉粒糊化，细胞壁破裂，利于有效成分的浸出。半夏多糖具有抗肿瘤的作用[6]，膨化半夏多糖含量明显高于半夏生品，表明膨化技术可以增加半夏多糖的含量。半夏为有毒中药，膨化后其他成分如何变化，还有待进一步研究。
参考文献
[1]贾淑珍，郝冉.膨化技术在中药材加工领域的应用 [J].农产品加工，2012（5）：75-76.
[2] 张英，张翠英，王盛民.红参膨化炮制实验研究 [J].时珍国医国药，2010，21（7）：1724-1725.
[3] 郭海霞，蔡正洪，范亚飞.挤压膨化炮制对何首乌中蒽醌含量的影响[J].中药材，2008，31（11）：1633-1634.
[4] 赵永娟，王蕾，侯林，等.半夏多糖抗肿瘤作用研究[J].中国药理学通报，2006，22（6）：368-371.
[5] 刘玲，周立，师健友，等.黔半夏多糖含量测定 [J].贵阳中医学院学报，2009，31（5）： 81-82.
[6] 张跃进，孟祥海，许玲.不同炮制方法对半夏化学成分含量的影响研究 [J].中国实验方剂学杂志，2008，14（12）：22-23.
关键词 半夏；膨化；多糖；苯酚-硫酸法
中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）12-195-02
Abstract [Objective] To investigate the impact of puffing concocted pinellia polysaccharide content.[Method] Using phenolsulfuric acid method，polysaccharide content of pinellia raw goods and puffed products were determined，extraction condition was optimized by using single factor experiment method.[Result] The results showed that polysaccharide content of pinellia raw goods is 12.88%.After the puffed unprocessed，pinellia tuber polysaccharides content increases to 14.55%.[Conclusion] Puffing method can significantly increase the content of pinellia tuber polysaccharides.
Key words Pinellia tuber； Puffed； Polysaccharide； Phenolsulfuric acid method
膨化技术[1]是一个广泛应用于食品行业的加工技术，它的原理是通过旋转螺杆的剪切、挤压及摩擦升温，膨化腔内产生高温高压后压力骤降至常温常压，原料中的水分骤然汽化做功，达到膨化的目的。已有人将此技术用于中药的炮制[2-3]，但对半夏的膨化还未见相关报道。多糖为半夏的另一有效成分，研究表明，半夏多糖具有抗肿瘤的作用[4]。笔者采用PH42型谷物膨化机，对半夏进行膨化，用苯酚-硫酸法[5]测定多糖含量，并与半夏饮片进行比较。
1 材料与方法
1.1 材料
供试药材：半夏药材购于成都荷花池药材市场，经西南交通大学王盛民教授鉴定为天南星科植物半夏[Pinellia ternata（Thunb.）Breit.]的块茎。
主要仪器：BSA224S电子天平，赛多利斯科学仪器北京有限公司；UV2450紫外分光光度计，苏州市莱顿科学仪器有限公司；恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；高速冷冻离心机，德国HERMIE公司Z323K。主要试剂：D葡萄糖对照品，购于中国药品生物制品检定所，批号110833200904。
1.2 方法
1.2.1 对照品溶液的制备。
精密称取105 ℃干燥至恒重的D无水葡萄糖对照品6.5 mg，置100 ml量瓶中，加纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
1.2.2 测定波长的选择。分别将半夏供试品和对照品液显色后，以空白试剂为对照，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录VA），在400～ 600 nm波长处进行光谱扫描，结果供试品和对照品液在486 nm处都有最大吸收，故选择486 nm作为测定波长。
1.2.3 显色条件的考察。影响显色的因素主要有水浴温度、水浴时间、苯酚浓度，试验对各影响因素进行考察。
1.2.3.1 水浴时间的考察。
精密吸取对照品溶液1.2 ml于试管中，加蒸馏水至2.0 ml，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温不同时间，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值，考察水浴时间对显色的影响。
1.2.3.2 水浴温度的考察。
精密吸取对照品溶液1.2 ml于试管中，方法同“1.2.3.1”，于不同温度水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以空白试剂为对照，在486 nm波长处测定吸光度值，考察水浴温度对显色的影响。
1.2.3.3 苯酚浓度的考察。
精密吸取对照品溶液1.2 ml于试管中，加蒸馏水至2.0 ml，分别精密加入不同浓度的苯酚10 ml，混匀，其余方法同“1.2.3.1”，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值，考察苯酚浓度对显色的影响。
1.2.3.4 供试品提取时间的考察。
精密称取半夏粗粉8份，每份1.0 g，置圆底烧瓶中，加水100 ml，称定重量，加热回流1.0、1.5、2.0、2.5 h，冷却，称重，补足重量，用脱脂棉滤过，精密吸取续滤液2.0 ml，加乙醇10.0 ml，摇匀，静置12 h，离心[4]，取沉淀加水溶解，置50 ml容量瓶中，稀释至刻度。精密吸取2.0 ml于试管中，立即加入5%苯酚溶液 1.0 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值，计算其含量，考察供试品提取时间对显色的影响。
1.2.4 供试品制备方法确定。 精密称取半夏粗粉l .0 g，置圆底烧瓶中，加水100 ml，称定重量，加热回流1.5 h，冷却，称重，补足重量，用脱脂棉滤过，精密吸取续滤液2.0 ml，加乙醇100 ml，摇匀，静置12 h，离心，取沉淀加水溶解，置50 ml容量瓶中，稀释至刻度。精密量取2.0 ml于试管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值。
1.2.5 标准曲线的制备。
精密吸取葡萄糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，分别加水至2.0 ml，立即加入5% 的苯酚10 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在486 nm波长处测定吸光度值，以吸光度（A）为纵坐标，浓度（mg/ml）为横坐标，绘制标准曲线。
1.2.6 方法学考察。对仪器精密度、样品稳定性、试验重复性进行考察，并计算样品的加样回收率。
2 结果与分析
2.1 水浴时间的考察 由图1可见，水浴时间为30 min时测得的吸光度值最高，故选择30 min为试验的最佳的水浴时间。
2.2 水浴温度的考察
由图2可知，水浴温度40 ℃测得的吸光度值最高，故选择40 ℃为试验的最佳水浴温度。
2.3 苯酚浓度的考察 由图3可知，加入5%苯酚和6%苯酚测得的吸光度值接近，但由于6%苯酚在水中溶解不充分，为保证测量的准确性，选择5%苯酚浓度最佳。
2.4 供试品提取时间的考察
由图4可知，提取1.5 h和20 h含量差别较小，但考虑到节约资源，选择1.5 h为最佳提取时间。
2.5 标准曲线的制备
按照“1.2.5”绘得标准曲线，得回归方程为y=12.582x+0.016 1，R2=0.999 2 （n=6），表明葡萄糖对照品在0.013 ～ 0.065 mg范围内呈良好的线性关系。
2.6 方法学考察
2.6.1 精密度考察。精密吸取对照品溶液各10 ml于6个试管中，按“1.2”项下的方法制备供试品和对照品，在486 nm波长处测定吸光度值，重复6次，结果RSD值为1.02%，表明仪器精度性良好。
2.6.2 稳定性考察。
精密吸取供试品溶液2.0 ml于试管中，立即加入5%苯酚溶液1.0 ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，于40 ℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，在0、30、60、120、180、240 min时测定吸光度值，结果RSD值为1.48%，表明供试品稳定性良好。
2.6.3 重复性考察。
取同一批半夏粗粉1.0 g，共6份，精密称定，按“1.2”项下方法制备供试品和对照品，在486 nm波长处测定吸光度值，重复6次，结果RSD值为1.16%，表明重复性良好。
2.6.4 加样回收率考察。
取同一批半夏粗粉约0.5 g，共6份（已知多糖含量为12.89%），分别精密加入葡萄糖对照品溶液1.0 ml（浓度为0.065 mg/ml），照“1.2”项下方法制备供试品和对照品，在486 nm波长处测定其吸光度值，计算含量，结果见表1。
加样回收试验结果表明，平均回收率为98.17%，RSD为1.02%，表明多糖回收率符合要求。
2.7 半夏膨化前后多糖含量测定
分别取半夏供试品1.0 g，各3份，精密称定，按“2.4”项下方法制备供试品和对照品，在486 nm波长处测定其吸光度值，计算半夏生品及膨化品的多糖含量，结果得出半夏生品中多糖含量为12.88%，膨化半夏中多糖含量为14.55%，由此可知，膨化半夏的多糖含量高于半夏饮片。
3 讨论
该试验采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，并对各影响因素做了考察，确定了最佳提取条件，试验方法简便、快捷，测定结果准确，可用于半夏多糖含量的分析。
中药材有效成分的提取工艺关系着中药材的利用率及提取物的药理活性，半夏的药用部位为块茎，质地致密坚硬，其有效成分不易提取。半夏膨化炮制后，成为空心网状结构的膨松体，硬度显著降低，同时内部结构改变，淀粉粒糊化，细胞壁破裂，利于有效成分的浸出。半夏多糖具有抗肿瘤的作用[6]，膨化半夏多糖含量明显高于半夏生品，表明膨化技术可以增加半夏多糖的含量。半夏为有毒中药，膨化后其他成分如何变化，还有待进一步研究。
参考文献
[1]贾淑珍，郝冉.膨化技术在中药材加工领域的应用 [J].农产品加工，2012（5）：75-76.
[2] 张英，张翠英，王盛民.红参膨化炮制实验研究 [J].时珍国医国药，2010，21（7）：1724-1725.
[3] 郭海霞，蔡正洪，范亚飞.挤压膨化炮制对何首乌中蒽醌含量的影响[J].中药材，2008，31（11）：1633-1634.
[4] 赵永娟，王蕾，侯林，等.半夏多糖抗肿瘤作用研究[J].中国药理学通报，2006，22（6）：368-371.
[5] 刘玲，周立，师健友，等.黔半夏多糖含量测定 [J].贵阳中医学院学报，2009，31（5）： 81-82.
[6] 张跃进，孟祥海，许玲.不同炮制方法对半夏化学成分含量的影响研究 [J].中国实验方剂学杂志，2008，14（12）：22-23.