论文部分内容阅读
摘要 [目的]调查水貂细菌病的病原种类及其耐药性，以更好地预防水貂细菌病。[方法]从山东某水貂场采集病料，通过病原分离和生化试验等方法对细菌进行了分离与鉴定，并在此基础上进行了药敏试验。[结果]分离菌鉴定为埃希氏菌、克雷伯菌、哈夫尼菌、志贺氏菌、成团泛菌、耶尔森菌和沙门氏菌。药敏试验结果表明所有分离株对头孢西叮、头孢他啶、头孢吡肟均敏感，对其他药物表现出不同程度的耐药性。[结论]水貂发生细菌病后，应尽可能通过药敏试验筛选敏感药物，避免盲目用药。
关键词 水貂；病原菌；鉴定；药敏试验
中图分类号 S852.6 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）12-391-02
Abstract [Objective]The research aimed to investigate the species of mink pathogens and their drug resistance and prevent the bacteriosis of minks. [Method] The diseased samples of minks were collected from a mink farm in Shandong Province. The pathogens were isolated and identified by pathogen isolation， identification， biochemical tests and drug sensitivity test. [Result] The isolated strains belonged to Escherichia， Klebsiella， Hafnia， Shigella， Pantoea， Yersinia and Salmonella. The results of drug sensitivity test demonstrated that all the isolated strains were sensitive to cephalosporins， ceftazidime and cefepime， which was resistant to other antimicrobials at different degree. [Conclusion] After the bacteriosis of minks occurred， the sensitive drugs should be selected by drug sensitivity test to avoid drug abuse.
Key words Mink； Pathogen； Identification； Drug sensitivity test
山东省地处沿海地区，其得天独厚的地理和气候条件，加上发达的畜禽养殖业和丰富的海洋渔业资源，为水貂养殖业的发展提供了坚实的基础，使山东省成为全国水貂养殖的大省。据海关贸易总署统计，全国平均年产水貂皮1 200万张，其中山东省占2/3。目前，在山东省沿海地区和家禽养殖大县，水貂养殖业已经成为农民增收的主要手段，成为当地经济发展和农民致富的支柱产业[1-2]。然而，由于养殖密度过大、疾病防疫意识淡薄等原因，水貂传染病不断发生，给水貂养殖业造成巨大的经济损失。笔者对某水貂场的病死水貂进行病原的分离、鉴定及药敏试验，以期避免抗菌药的滥用，减少耐药菌株的产生，为临床治疗提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 病料 病料来自山东威海某水貂养殖场病死水貂。
1.2 试剂与仪器 普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基，均购自北京路桥技术有限责任公司；微量糖发酵管和药敏纸片，均购自杭州天和微生物试剂有限公司。
1.3 细菌的分离培养
无菌条件下，取病死水貂心脏、肝脏、肺脏等病料划线接种于普通营养琼脂培养基和麦康凯培养基上，37 ℃下培养24 h。挑取单个菌落进行革兰氏染色后，置于显微镜下进行镜检。
1.4 细菌的生化鉴定
挑取单菌落分别接种于微量糖发酵管、三糖铁琼脂培养基，对疑似肠杆菌科的细菌，按照常规方法进行吲哚、MR、VP及柠檬酸盐利用试验（简称IMViC试验）[3]。
1.5 药敏试验
将纯化的菌落接种于普通肉汤，37 ℃摇床培养12 h。将新鲜菌液用灭菌生理盐水稀释至浓度108CFU/ml，用灭菌的棉棒涂布于普通琼脂平板。然后，将18种药敏纸片贴在培养基的表面，37 ℃培养18 h后观察结果[4]，按照CLSL标准进行药物敏感性评价[5]。
2 结果与分析
2.1 细菌分离培养及鉴定结果
由表1可知，在病死水貂中共分离到7种细菌，共17株，菌落形态、染色特性及生化试验表明全部为革兰氏阴性菌，隶属肠杆菌科。其中，分离率最高的细菌为大肠杆菌（59%），其次为哈夫尼菌（12%）；另外，还分离到耶尔森菌、成团泛菌、志贺氏菌、沙门氏菌和克雷伯菌，占分离菌株的29%。在麦康凯培养基上，大肠杆
菌和克雷伯菌形成红色菌落，但克雷伯菌的菌落粘稠，用接种环可挑起丝状物，另外也不能利用蔗糖。哈夫尼菌、耶尔森、成团泛菌、志贺氏菌和沙门氏菌均不能利用乳糖，所以在麦康凯培养基上均形成无色菌落，在三糖铁培养基上的表现及IMViC试验结果均存在差异。
2.2 药敏试验结果
从表2可以看出，70%以上的菌株对头孢派酮、头孢西叮、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、左氧沙星和磷霉素敏感，23%以上的菌株对头孢哌酮、阿米卡星的敏感性处于中介，30%以上的菌株对头孢噻吩、头孢呋辛、环丙沙星、诺氟沙星、链霉素、氯霉素、四环素和氨苄西林耐药。所有分离菌株对头孢西叮、头孢他啶和头孢吡肟均敏感。 3 讨论
目前临床上治疗水貂细菌性疾病的药物有很多，但由于养殖户长期滥用抗生素，使细菌的耐药性不断增加，造成水貂患病后缺乏有效药物，甚至无药可用。该试验结果发现从病死水貂体内分离出的7种细菌对15种抗生素均产生了一定程度的耐药性。同时试验结果也表明，同一种细菌不同菌株的耐药性也不相同。这与细菌表达的多样性有关[6]。因此，同一种细菌引发的感染用相同的药物治疗，治疗效果可能会差别很大，一旦出现治疗无效的情况应立即进行药敏试验，筛选敏感药物，加以治疗。但是，由于细菌耐药性的产生与抗生素的长期大剂量使用有关，在临床治疗中应选择比较敏感的药物联合或交替使用，以减少单个药物的使用剂量和使用时间，从而减缓耐药菌株的产生[7]。
水貂细菌病的发生是由多种病原引起的。对某水貂养殖场进行了连续检测，共分离到7种细菌，均为肠杆菌科细菌，说明肠杆菌科的细菌是目前水貂细菌病发生的主要病原。肠杆菌科细菌中，沙门氏菌、志贺氏菌、克雷伯菌、大肠杆菌和耶尔森菌对人和动物具有广泛的致病性[8]，具有重要的公共卫生意义，应引起足够重视。哈夫尼菌和成团泛菌大多为条件致病菌，水貂患此类细菌病与水貂的抵抗力降低有直接关系[9-10]。在气候突变、管理不当时，水貂抵抗力下降，环境中和体内的条件性致病菌容易入侵机体，引起疾病的发生，但一般不会造成大面积流行。
参考文献
[1]王桂芝，秦孜娟，张玮.山东省毛皮动物养殖业现状存在的问题及对策[J].山东畜牧兽医，2014，35（8）：21-22.
[2] 马利.水貂养殖商机巨大[J].吉林畜牧兽医，2002（5）：27-28.
[3] 胡桂学.兽医微生物学实验教程[M].北京：中国农业大学出版社，2006：47-60.
[4] 邹玲.水貂大肠杆菌病的诊断[J].中国畜牧兽医，2009，36（5）：147-148.
[5] 孙长贵，李敏，孙自镛，等，译.抗菌药物敏感性试验执行标准；第二十二版资料增刊[J].中华检验医学杂志，2012，32（3）：44-49.
[6] 曹荣峰，王继芳.水貂细菌病的药敏试验和防治[J].中国动物保健，2008（12）：61-63.
[7] 王效田，孔祥峰，夏明龙，等.南京郊区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J].畜牧与兽医，2004，36（11）：6-8.
[8] 陆承平.兽医微生物学[M].4版.北京：中国农业出版社，2007：97-121.
[9] 赵岭乐.水貂克雷伯氏菌病的综合诊断与治疗技术[J].特产研究，2003，25（3）：36-37.
[10] 刘德福，王广森.水貂巴氏杆菌与沙门氏杆菌混合感染的诊治[J].特种经济动植物，2003（4）：44-45.
关键词 水貂；病原菌；鉴定；药敏试验
中图分类号 S852.6 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）12-391-02
Abstract [Objective]The research aimed to investigate the species of mink pathogens and their drug resistance and prevent the bacteriosis of minks. [Method] The diseased samples of minks were collected from a mink farm in Shandong Province. The pathogens were isolated and identified by pathogen isolation， identification， biochemical tests and drug sensitivity test. [Result] The isolated strains belonged to Escherichia， Klebsiella， Hafnia， Shigella， Pantoea， Yersinia and Salmonella. The results of drug sensitivity test demonstrated that all the isolated strains were sensitive to cephalosporins， ceftazidime and cefepime， which was resistant to other antimicrobials at different degree. [Conclusion] After the bacteriosis of minks occurred， the sensitive drugs should be selected by drug sensitivity test to avoid drug abuse.
Key words Mink； Pathogen； Identification； Drug sensitivity test
山东省地处沿海地区，其得天独厚的地理和气候条件，加上发达的畜禽养殖业和丰富的海洋渔业资源，为水貂养殖业的发展提供了坚实的基础，使山东省成为全国水貂养殖的大省。据海关贸易总署统计，全国平均年产水貂皮1 200万张，其中山东省占2/3。目前，在山东省沿海地区和家禽养殖大县，水貂养殖业已经成为农民增收的主要手段，成为当地经济发展和农民致富的支柱产业[1-2]。然而，由于养殖密度过大、疾病防疫意识淡薄等原因，水貂传染病不断发生，给水貂养殖业造成巨大的经济损失。笔者对某水貂场的病死水貂进行病原的分离、鉴定及药敏试验，以期避免抗菌药的滥用，减少耐药菌株的产生，为临床治疗提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 病料 病料来自山东威海某水貂养殖场病死水貂。
1.2 试剂与仪器 普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基，均购自北京路桥技术有限责任公司；微量糖发酵管和药敏纸片，均购自杭州天和微生物试剂有限公司。
1.3 细菌的分离培养
无菌条件下，取病死水貂心脏、肝脏、肺脏等病料划线接种于普通营养琼脂培养基和麦康凯培养基上，37 ℃下培养24 h。挑取单个菌落进行革兰氏染色后，置于显微镜下进行镜检。
1.4 细菌的生化鉴定
挑取单菌落分别接种于微量糖发酵管、三糖铁琼脂培养基，对疑似肠杆菌科的细菌，按照常规方法进行吲哚、MR、VP及柠檬酸盐利用试验（简称IMViC试验）[3]。
1.5 药敏试验
将纯化的菌落接种于普通肉汤，37 ℃摇床培养12 h。将新鲜菌液用灭菌生理盐水稀释至浓度108CFU/ml，用灭菌的棉棒涂布于普通琼脂平板。然后，将18种药敏纸片贴在培养基的表面，37 ℃培养18 h后观察结果[4]，按照CLSL标准进行药物敏感性评价[5]。
2 结果与分析
2.1 细菌分离培养及鉴定结果
由表1可知，在病死水貂中共分离到7种细菌，共17株，菌落形态、染色特性及生化试验表明全部为革兰氏阴性菌，隶属肠杆菌科。其中，分离率最高的细菌为大肠杆菌（59%），其次为哈夫尼菌（12%）；另外，还分离到耶尔森菌、成团泛菌、志贺氏菌、沙门氏菌和克雷伯菌，占分离菌株的29%。在麦康凯培养基上，大肠杆
菌和克雷伯菌形成红色菌落，但克雷伯菌的菌落粘稠，用接种环可挑起丝状物，另外也不能利用蔗糖。哈夫尼菌、耶尔森、成团泛菌、志贺氏菌和沙门氏菌均不能利用乳糖，所以在麦康凯培养基上均形成无色菌落，在三糖铁培养基上的表现及IMViC试验结果均存在差异。
2.2 药敏试验结果
从表2可以看出，70%以上的菌株对头孢派酮、头孢西叮、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、左氧沙星和磷霉素敏感，23%以上的菌株对头孢哌酮、阿米卡星的敏感性处于中介，30%以上的菌株对头孢噻吩、头孢呋辛、环丙沙星、诺氟沙星、链霉素、氯霉素、四环素和氨苄西林耐药。所有分离菌株对头孢西叮、头孢他啶和头孢吡肟均敏感。 3 讨论
目前临床上治疗水貂细菌性疾病的药物有很多，但由于养殖户长期滥用抗生素，使细菌的耐药性不断增加，造成水貂患病后缺乏有效药物，甚至无药可用。该试验结果发现从病死水貂体内分离出的7种细菌对15种抗生素均产生了一定程度的耐药性。同时试验结果也表明，同一种细菌不同菌株的耐药性也不相同。这与细菌表达的多样性有关[6]。因此，同一种细菌引发的感染用相同的药物治疗，治疗效果可能会差别很大，一旦出现治疗无效的情况应立即进行药敏试验，筛选敏感药物，加以治疗。但是，由于细菌耐药性的产生与抗生素的长期大剂量使用有关，在临床治疗中应选择比较敏感的药物联合或交替使用，以减少单个药物的使用剂量和使用时间，从而减缓耐药菌株的产生[7]。
水貂细菌病的发生是由多种病原引起的。对某水貂养殖场进行了连续检测，共分离到7种细菌，均为肠杆菌科细菌，说明肠杆菌科的细菌是目前水貂细菌病发生的主要病原。肠杆菌科细菌中，沙门氏菌、志贺氏菌、克雷伯菌、大肠杆菌和耶尔森菌对人和动物具有广泛的致病性[8]，具有重要的公共卫生意义，应引起足够重视。哈夫尼菌和成团泛菌大多为条件致病菌，水貂患此类细菌病与水貂的抵抗力降低有直接关系[9-10]。在气候突变、管理不当时，水貂抵抗力下降，环境中和体内的条件性致病菌容易入侵机体，引起疾病的发生，但一般不会造成大面积流行。
参考文献
[1]王桂芝，秦孜娟，张玮.山东省毛皮动物养殖业现状存在的问题及对策[J].山东畜牧兽医，2014，35（8）：21-22.
[2] 马利.水貂养殖商机巨大[J].吉林畜牧兽医，2002（5）：27-28.
[3] 胡桂学.兽医微生物学实验教程[M].北京：中国农业大学出版社，2006：47-60.
[4] 邹玲.水貂大肠杆菌病的诊断[J].中国畜牧兽医，2009，36（5）：147-148.
[5] 孙长贵，李敏，孙自镛，等，译.抗菌药物敏感性试验执行标准；第二十二版资料增刊[J].中华检验医学杂志，2012，32（3）：44-49.
[6] 曹荣峰，王继芳.水貂细菌病的药敏试验和防治[J].中国动物保健，2008（12）：61-63.
[7] 王效田，孔祥峰，夏明龙，等.南京郊区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J].畜牧与兽医，2004，36（11）：6-8.
[8] 陆承平.兽医微生物学[M].4版.北京：中国农业出版社，2007：97-121.
[9] 赵岭乐.水貂克雷伯氏菌病的综合诊断与治疗技术[J].特产研究，2003，25（3）：36-37.
[10] 刘德福，王广森.水貂巴氏杆菌与沙门氏杆菌混合感染的诊治[J].特种经济动植物，2003（4）：44-45.