【摘 要】
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目的探讨非传统型前折叠束RPB5交互因子（URI）对肝癌HepG2细胞生物学功能的影响及其分子机制。 方法设计并构建URI真核表达和URI shRNA干扰载体，转染肝癌HepG2细胞并筛选稳定转染细胞株。采用CCK-8实验和软琼脂克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力和体外锚定非依赖性生长的能力，采用流式细胞仪检测γ射线照射后各组细胞的细胞周期和细胞凋亡，采用Western blot法检测凋亡相关蛋白
【机 构】
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215123苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,215123苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,215123苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,215123苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室,
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目的探讨非传统型前折叠束RPB5交互因子（URI）对肝癌HepG2细胞生物学功能的影响及其分子机制。
方法设计并构建URI真核表达和URI shRNA干扰载体，转染肝癌HepG2细胞并筛选稳定转染细胞株。采用CCK-8实验和软琼脂克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力和体外锚定非依赖性生长的能力，采用流式细胞仪检测γ射线照射后各组细胞的细胞周期和细胞凋亡，采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量。
结果成功构建了URI表达质粒和干扰质粒，并获得相应的稳定转染细胞株。HepG2组、pCDNA3.1-URI-HepG2组和pGPU6-URIi-HepG2组细胞转染第7天相对于第1天的增殖促进率分别为(588.78±32.12)%、(959.33±58.80)%和(393.93±39.70)%，差异均有统计学意义(均P＜0.05)。HepG2组、pCDNA3.1-URI-HepG2组和pGPU6-URIi-HepG2组的克隆数分别为(43±7)个、(85±5)个和(20±4)个，差异有统计学意义(P＜0.05)。γ射线照射后， pCDNA3.1-URI-HepG2组细胞凋亡和G2/M期阻滞较HepG2组明显降低(P＜0.05)，pGPU6-URIi-HepG2组细胞凋亡和G2/M期阻滞较HepG2组明显升高(P＜0.05)。Western blot结果显示，HepG2细胞的URI、Bax和Bcl-2蛋白相对表达水平分别为0.92±0.03、1.11±0.13和0.82±0.01，pCDNA3.1-URI-HepG2组细胞的URI、Bax和Bcl-2蛋白相对表达水平分别为1.79±0.12、0.48±0.01和2.20±0.30，pGPU6-URIi-HepG2组细胞的URI、Bax和Bcl-2蛋白相对表达水平分别为0.50±0.04、1.52±0.20和0.38±0.01。pCDNA3.1-URI-HepG2组细胞凋亡相关蛋白Bax表达水平低于HepG2组，Bcl-2蛋白表达水平高于HepG2组；pGPU6-URIi-HepG2组细胞Bax蛋白表达水平高于HepG2组，Bcl-2蛋白表达水平低于HepG2组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论URI能够通过促进细胞增殖和抵抗细胞凋亡来促进肝癌细胞的生长。而干扰URI表达后，肝癌细胞的增殖能力被抑制，细胞抵抗γ射线照射的能力降低，URI可能成为肝癌治疗的新靶点。
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