【摘 要】
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目的:用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体.方法:通过基因合成的方法,将mir30前体骨架进行全长基因合成,并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹D
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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目的:用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体.方法:通过基因合成的方法,将mir30前体骨架进行全长基因合成,并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆,然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中.将针对绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的小干扰RNA克隆到以上表达载体中,通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率.结果:同目前常用的含polⅢ的小干扰RNA表达载体相比较,用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达.结论:用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA.
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