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摘 要：国际市场在最近几年，愈发强烈地需求肝素原料，低分子量肝素的市场迅速且稳定扩大，并保持了高增长趋势。肝素药理作用和生物化学被更多人深入探索研究，其例如抗过敏、抗炎、降血脂、扩张冠脉、抗动脉粥样硬化、抑制单纯疱疹病毒活性、抗肿瘤转移、诱导干扰素的产生以及缓解支气管痉挛等等潜在作用被发掘，粗肝素是其中的低端产品，肝素原料药为其中的中间产品，低分子肝素制剂为其中的高端产品。本文的目的是探索研究伊诺肝素的制备工艺。
关键词：伊诺肝素;肝素钠;氯化钠;制备工艺
伊诺肝素是一种低分子量肝素，用作抗凝剂，用于预防和治疗深静脉血栓形成及预防和治疗肺栓塞，通用名为Enoxaparin[1]。伊诺肝素钠是一种白色或类白色粉末，有引湿性、无味、不溶于有机溶剂、易溶于水。其在水溶液中具有很强的负电荷，可以与一些阳离子结合以形成分子络合物。水溶液在pH为7下是比较稳定的。伊诺肝素钠皮下注射作为一种常见的皮下注射，其最大作用时间为3～5h，生物利用度为92%，持续时间为24h。对于深静脉血栓、肺栓塞等多种疾病有很好的预防和治疗作用[2-3]。低分子肝素拥有临床疗效明确、抗血栓效果显著增强、显著改善人体药动学的性质、对血小板的副作用小、使用方便安全等优点[4]。本次研究主要阐述制备生产伊诺肝素钠的工艺。
1 仪器与试剂
Agilent的1100型高效液相色谱仪;1100型示差检测仪以及TSK-GEL凝胶色谱柱;日本岛津的UV-2101PC型紫外检测仪;弱酸性丙烯酸系阴离子交换柱;葡聚糖凝胶G15层析柱。深圳海普瑞药业有限公司的肝素钠;欧洲药典标准品要求的伊诺肝素钠标准品;其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1 方法
将粗品伊诺肝素钠溶于质量百分浓度为2.0%-3.0%氯化钠溶液中，得到伊诺肝素的溶液，向滤液中加碱液（质量百分浓度为10%-20%的氢氧化钠溶液）直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得滤液;将滤液用体积浓度在0.9%-2.7%之间盐酸调批pH到7.5-8.5，上疏水层析柱，用1mol/L-5mol/L pH在7.5-8.5之间氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液;将收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到阴离子交换柱，上样结束后，用0.2mol/L-0.5mol/L的氯化钠溶液洗涤柱体直至钡盐检测无白色浑浊，最后以1mol/L-3mol/L的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液;将洗脱液进行纳滤脱盐浓缩，直至浓缩液中伊诺肝素鈉的浓度为10wt%-25wt%;将得到的浓缩液沉淀，干燥即得到伊诺肝素钠成品。
2.2 操作
将粗品伊诺肝素钠溶于氯化钠溶液中，得到伊诺肝素的溶液，向滤液中加碱液直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得滤液;称取伊诺肝素钠20g，加入质量分数2.0%的氯化钠溶液使得到伊诺肝素钠溶液后过滤。向得到的滤液中加入质量分数10%的氢氧化钠溶液直至产生沉淀，将其静置2h后过滤，得到滤液。
将所得滤液用0.9%（v/v）体积浓度的盐酸将pH调至8.0，上葡聚糖凝胶G15层析柱，用1mol/L pH8.0的氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液。
将收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到弱酸性丙烯酸系阴离子交换柱，上样结束后，分别0.3mol/L的氯化钠溶液洗涤柱体，直至钡盐检测无白色浑浊。
以2mol/L的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液;孔径1000纳的滤膜过滤洗脱液脱盐浓缩，浓缩液中伊诺肝素钠的浓度为15wt%;将得到的浓缩液沉淀，干燥即得到伊诺肝素钠成品。最终得到的伊诺肝素钠样品通过检测，各项指标符合欧洲药典标准。
2.3 检测
精密称伊诺肝素钠标准品5mg，溶于0.5ml的0.2mol/L pH=5.0硫酸钠溶液，得标准品溶液;精密称取10mg伊诺肝素钠，用1ml的0.2mol/L pH=5.0硫酸钠溶液溶解，得供试品溶液。检测条件为：TSK-GEL凝胶色谱柱（7.8mm×300mm，5μm），由0.2mol/L pH=5.0硫酸钠溶液作为流动相，0.5ml/min流速，25μl进样量，234nm检测波长，使用高效液相色谱的Excel软件计算数据。伊诺肝素钠样品和伊诺肝素钠标准品，两者所得的红外特征吸收峰和核磁共振图谱一致。伊诺肝素钠样品的检测按照欧洲药典5.3版进行，结果见表1。
3 研究结论
通过红外特征吸收峰以及核磁共振波谱对比，伊诺肝素钠样品和标准品一致，最终得到的伊诺肝素钠样品各项指标符合欧洲药典。
低分子肝素是治疗急性静脉血栓疾病和急性冠脉综合征疾病等的首要选择[5]。伊诺肝素可用于预防深静脉血栓的形成及预防肺栓塞，对形成的静脉血栓进行治疗，防止血液透析时体外循环期间形成血栓，对不稳定性心绞痛及非Q波心梗进行治疗其钠盐伊诺肝素钠被临床使用。依诺肝素是以肝素原料药加工形成的，临床医学方面的应用更广泛，其生产工艺也在被一步步探索和改进，探索研究其影响产品质量的各种参数，依然是未来的研究热点。
参考文献
[1] 薛发珍. 浅析药品依诺肝素钠的生产工艺[J].科技创新，2015， （11）：73.
[2] 杨胜凯. 依诺肝素钠的制备方法[J]. 河北企业，2015， （7）：115.
[3] 魏朝辉，唐立环，付刚，等. 依诺肝素钠在恶性肿瘤化疗中对深静脉血栓的预防价值研究[J].河北医药，2020，42（4）：605-607.
[4] 于晴，李晓露，王慧敏，等. 不同剂量低分子肝素对AECOPD患者炎症反应抑制及凝血功能影响研究[J].中华保健医学杂志，2020，22（2）：140-142.
[5] 戴辰程，何楠，肖燕燕，等. 低分子肝素联合阿司匹林在儿童心导管术后股动脉血栓治疗中的效果[J].中国医药，2020，15（2）：198-201.
关键词：伊诺肝素;肝素钠;氯化钠;制备工艺
伊诺肝素是一种低分子量肝素，用作抗凝剂，用于预防和治疗深静脉血栓形成及预防和治疗肺栓塞，通用名为Enoxaparin[1]。伊诺肝素钠是一种白色或类白色粉末，有引湿性、无味、不溶于有机溶剂、易溶于水。其在水溶液中具有很强的负电荷，可以与一些阳离子结合以形成分子络合物。水溶液在pH为7下是比较稳定的。伊诺肝素钠皮下注射作为一种常见的皮下注射，其最大作用时间为3～5h，生物利用度为92%，持续时间为24h。对于深静脉血栓、肺栓塞等多种疾病有很好的预防和治疗作用[2-3]。低分子肝素拥有临床疗效明确、抗血栓效果显著增强、显著改善人体药动学的性质、对血小板的副作用小、使用方便安全等优点[4]。本次研究主要阐述制备生产伊诺肝素钠的工艺。
1 仪器与试剂
Agilent的1100型高效液相色谱仪;1100型示差检测仪以及TSK-GEL凝胶色谱柱;日本岛津的UV-2101PC型紫外检测仪;弱酸性丙烯酸系阴离子交换柱;葡聚糖凝胶G15层析柱。深圳海普瑞药业有限公司的肝素钠;欧洲药典标准品要求的伊诺肝素钠标准品;其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1 方法
将粗品伊诺肝素钠溶于质量百分浓度为2.0%-3.0%氯化钠溶液中，得到伊诺肝素的溶液，向滤液中加碱液（质量百分浓度为10%-20%的氢氧化钠溶液）直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得滤液;将滤液用体积浓度在0.9%-2.7%之间盐酸调批pH到7.5-8.5，上疏水层析柱，用1mol/L-5mol/L pH在7.5-8.5之间氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液;将收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到阴离子交换柱，上样结束后，用0.2mol/L-0.5mol/L的氯化钠溶液洗涤柱体直至钡盐检测无白色浑浊，最后以1mol/L-3mol/L的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液;将洗脱液进行纳滤脱盐浓缩，直至浓缩液中伊诺肝素鈉的浓度为10wt%-25wt%;将得到的浓缩液沉淀，干燥即得到伊诺肝素钠成品。
2.2 操作
将粗品伊诺肝素钠溶于氯化钠溶液中，得到伊诺肝素的溶液，向滤液中加碱液直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得滤液;称取伊诺肝素钠20g，加入质量分数2.0%的氯化钠溶液使得到伊诺肝素钠溶液后过滤。向得到的滤液中加入质量分数10%的氢氧化钠溶液直至产生沉淀，将其静置2h后过滤，得到滤液。
将所得滤液用0.9%（v/v）体积浓度的盐酸将pH调至8.0，上葡聚糖凝胶G15层析柱，用1mol/L pH8.0的氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液。
将收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到弱酸性丙烯酸系阴离子交换柱，上样结束后，分别0.3mol/L的氯化钠溶液洗涤柱体，直至钡盐检测无白色浑浊。
以2mol/L的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液;孔径1000纳的滤膜过滤洗脱液脱盐浓缩，浓缩液中伊诺肝素钠的浓度为15wt%;将得到的浓缩液沉淀，干燥即得到伊诺肝素钠成品。最终得到的伊诺肝素钠样品通过检测，各项指标符合欧洲药典标准。
2.3 检测
精密称伊诺肝素钠标准品5mg，溶于0.5ml的0.2mol/L pH=5.0硫酸钠溶液，得标准品溶液;精密称取10mg伊诺肝素钠，用1ml的0.2mol/L pH=5.0硫酸钠溶液溶解，得供试品溶液。检测条件为：TSK-GEL凝胶色谱柱（7.8mm×300mm，5μm），由0.2mol/L pH=5.0硫酸钠溶液作为流动相，0.5ml/min流速，25μl进样量，234nm检测波长，使用高效液相色谱的Excel软件计算数据。伊诺肝素钠样品和伊诺肝素钠标准品，两者所得的红外特征吸收峰和核磁共振图谱一致。伊诺肝素钠样品的检测按照欧洲药典5.3版进行，结果见表1。
3 研究结论
通过红外特征吸收峰以及核磁共振波谱对比，伊诺肝素钠样品和标准品一致，最终得到的伊诺肝素钠样品各项指标符合欧洲药典。
低分子肝素是治疗急性静脉血栓疾病和急性冠脉综合征疾病等的首要选择[5]。伊诺肝素可用于预防深静脉血栓的形成及预防肺栓塞，对形成的静脉血栓进行治疗，防止血液透析时体外循环期间形成血栓，对不稳定性心绞痛及非Q波心梗进行治疗其钠盐伊诺肝素钠被临床使用。依诺肝素是以肝素原料药加工形成的，临床医学方面的应用更广泛，其生产工艺也在被一步步探索和改进，探索研究其影响产品质量的各种参数，依然是未来的研究热点。
参考文献
[1] 薛发珍. 浅析药品依诺肝素钠的生产工艺[J].科技创新，2015， （11）：73.
[2] 杨胜凯. 依诺肝素钠的制备方法[J]. 河北企业，2015， （7）：115.
[3] 魏朝辉，唐立环，付刚，等. 依诺肝素钠在恶性肿瘤化疗中对深静脉血栓的预防价值研究[J].河北医药，2020，42（4）：605-607.
[4] 于晴，李晓露，王慧敏，等. 不同剂量低分子肝素对AECOPD患者炎症反应抑制及凝血功能影响研究[J].中华保健医学杂志，2020，22（2）：140-142.
[5] 戴辰程，何楠，肖燕燕，等. 低分子肝素联合阿司匹林在儿童心导管术后股动脉血栓治疗中的效果[J].中国医药，2020，15（2）：198-201.