【摘 要】
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目的 观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响。方法 在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.
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目的 观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响。方法 在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电镜观察线粒体自噬现象;激光共聚焦显微镜观察溶酶体吞噬线粒体活性;Western bolt检测自噬标志蛋白LC3和P62及自噬调节蛋白PINK1和Parkin表达水平。结果 METH诱导SH-SY5Y细胞24 h后,SH-SY5Y细胞凋亡水平与METH剂量呈正相关(P <0.05);线粒体超微结构破坏严重,数量减少,出现自噬小体,溶酶体数量增加,吞噬线粒体活性增强(P <0.05);LC3-II/LC3-I比值上升(P <0.05),P62蛋白早期表达水平不变,48 h后表达量下调(P <0.05);Parkin蛋白表达量升高,PINK1蛋白表达量无明显变化。结论 METH通过诱导PINK1/Parkin信号通路介导了线粒体自噬,其自噬流通畅,自噬流未端反馈迟滞,可能与SHSY5Y细胞凋亡有关。
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