【摘 要】
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为了构建牛冠状病毒(BCoV)抗原表位基因原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术获得BCoV S蛋白两段抗原表位(351 aa～403 aa、771 aa～784 aa)的基因串联体R,将其重组到
【机 构】
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山东省农业科学院奶牛研究中心; 山东省威海市文登区宋村畜牧兽医工作站;
【基金项目】
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十三五”国家重点研发计划(2016YFD0500904,2017YFD0500904);现代农业(奶牛)产业技术体系科学家岗位(CARS-36);山东省自然科学基金(ZR2016CP09);山东省农业科学院农业科技创新工程(CXGC2016B14,CXGC2016A10);山东省农业科学院青年基金(2014QNM17)
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为了构建牛冠状病毒(BCoV)抗原表位基因原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术获得BCoV S蛋白两段抗原表位(351 aa～403 aa、771 aa～784 aa)的基因串联体R,将其重组到pET-28a(+)质粒中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达抗原表位融合蛋白,用纯化的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果显示,成功构建了BCoV抗原表位基因重组表达质粒,获得了融合蛋白的抗血清,Western-Blot检测显示,该抗血清可与BCoV的融合蛋白特异性结合。表明成功构建了BCoV抗原表位基因原核表达载体并获得了BCo V抗血清,本研究为BCoV诊断试剂盒的开发和BCoV多表位疫苗的研究奠定了基础。
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