【摘 要】
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目的探讨miRNA-206介导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为软骨细胞及其在骨关节炎（OA）模型中的可能作用。方法2017年1月至2018年7月,分离大鼠BMSCs,流式细胞术检测CD90、CD45,鉴定BMSCs的纯度。使用慢病毒载体将miRNA-206或miRNA-206抑制剂转染到BMSCs,地塞米松诱导14 d,阿利新蓝染色和II型胶原免疫染色检测成软骨分化的能力。MTT法检测BMSC
【机 构】
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目的探讨miRNA-206介导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为软骨细胞及其在骨关节炎（OA）模型中的可能作用。
方法2017年1月至2018年7月,分离大鼠BMSCs,流式细胞术检测CD90、CD45,鉴定BMSCs的纯度。使用慢病毒载体将miRNA-206或miRNA-206抑制剂转染到BMSCs,地塞米松诱导14 d,阿利新蓝染色和II型胶原免疫染色检测成软骨分化的能力。MTT法检测BMSCs的增殖能力,Western blot检测成软骨细胞中标志蛋白Aggrecan、Col II、Sox9、Runx2的表达水平。RT-PCR检测成软骨细胞中标志基因Sox9 mRNA的表达水平。在OA大鼠模型中尾静脉注射慢病毒载体转染miRNA-206或miRNA-206抑制剂,Western blot检测软骨形成的标志蛋白Aggrecan、Col II、Sox9、Runx2。
结果分离的BMSCs的纯度为(80.7±3.9)%；miRNA-206转染BMSCs可以促进细胞增殖能力,增加其成软骨分化；Western blot结果表明miRNA-206转染组可以增加软骨细胞中标志性蛋白Aggrecan、Col II、Sox9的表达,下调Runx2的表达。同时RT-PCR结果表明miRNA-206上调BMSCs成软骨细胞标志基因Sox9 mRNA的表达。与OA组比较,miRNA-206可以增加软骨组织中信号蛋白Aggrecan、Col II、Sox9的表达(P<0.05),下调Runx2的表达水平(P<0.05)。
结论miRNA-206可以正调控BMSCs分化为软骨细胞,增加细胞增殖能力,上调软骨标志蛋白Aggrecan、Col II、Sox9的表达,下调Runx2,并可能增加OA大鼠模型中成软骨能力。
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