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组织分离法为一种无性繁殖方法，分离技术较为简单，即采用子实体的菌肉组织进行分离培养，是获得纯菌种最常用的方法。金针菇组织分离法的具体操作如下：选用PSA或PDA等斜面培养基，所用培养基必须保持斜面上无多余的游离冷凝水，否则容易引起细菌、酵母污染。选择符合该品种特征、生长良好、朵形圆整、无杂菌污染和虫害的子实体。种菇培养的环境应尽量清洁无污染并满足其生长条件。