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目的
通过体外报告基因实验观察腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ATP－binding cassette transporter A1, ABCA1)基因启动子区VNTR－ZNF位点和－14nt位点变异对转录活性的影响。
方法采用基因重组技术将含ABCA1启动子区域VNTR－ZNF位点ACCCC插入型或缺失型DNA片段和同时含VNTR－ZNF位点插入/缺失变异与－14ntC或T等位基因的DNA片段分别插入携带荧光素酶报告基因的表达载体PGL2，构建重组质粒。以重组质粒转染HepG2细胞后培养48 h，收集并裂解细胞，测定细胞液中荧光素酶活性，观察和分析启动子部位VNTR－ZNF和－14nt位点的序列变异对于转录活性的影响。
结果成功构建了ABCA1基因启动子VNTR－ZNF单一位点表达载体(PGL2－ZNF－ACCCCDel、PGL2－ZNF－ACCCCIns)及VNTR－ZNF和－14nt双位点表达载体(PGL2－ZNFDel－14C、PGL2－ZNFDel－14T、 PGL2－ZNFIns－14C和PGL2－ZNFIns－14T)。报告基因表达结果显示：经转染HepG2细胞培养48 h，单一位点表达载体PGL2－ZNF－ACCCCDel荧光素酶活性明显高于PGL2－ZNF－ACCCCIns，双位点表达载体中PGL2－ZNFDel－14C重组质粒荧光素酶活性明显高于PGL2－ZNFIns－14C、PGL2－ZNFDel－14T、PGL2－ZNFIns－14T。
结论ABCA1基因启动子区域VNTR－ZNF位点ACCCC缺失型等位基因可明显增强ABCA1的转录活性， －14nt C等位基因与VNTR－ZNF缺失型等位基因具有协同作用，使ABCA1的转录活性进一步加强。