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摘 要：罗红霉素由于其良好的抗菌效果，广泛的应用于临床，治疗敏感菌所致的呼吸道、泌尿道、耳鼻咽喉等。本文采用高校液相测定了罗红霉素颗粒剂中罗红霉素的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-甲醇-0.083moloL-1醋酸铵 （50：28：22）（醋酸调节pH6.8）为流动相，检测波长为215nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。罗红霉素在0.2～12.8mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。罗红霉素的平均回收率为99.6%，RSD为0.68%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于罗红霉素颗粒剂中罗红霉素的含量测定。
关键词：罗红霉素颗粒剂；罗红霉素；含量
罗红霉素化学名为9-[O-[（2-甲氧基乙氧基）-甲基]肟]红霉素，为半合成的14元环大环内酯类抗生素。罗红霉素适用于化脓性链球菌引起的咽炎及扁桃体炎，敏感菌所致的鼻窦炎、中耳炎、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作；敏感细菌引起的皮肤软组织感染；沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎。本文采用高校液相测定了罗红霉素颗粒剂中罗红霉素的含量。
1 仪器与试药
Kertone lab day 20实验室纯水机（科尔顿（中国）有限公司）；EasyGuard保护柱（岛津技迩上海商贸有限公司）；SPECORD250 PLUS紫外可见分光光度计（德国耶拿分析仪器股份公司）；ULABO 实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；QUINTIX224电子天平（锡楼兰仪器系统有限公司）；VERTEX VI500高效液相色谱仪（上海禾工科学仪器有限公司）；HH-4A数显电子恒温搅拌水浴锅（江苏省金坛市宏华仪器厂）；PH510台式精密酸度计（安莱立思仪器科技（上海）有限公司）；SK3300HP功率可调台式超声波清洗器（上海垒固仪器有限公司）。罗红霉素对照品由中国药品生物制品检定所提供。醋酸铵（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、醋酸（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、乙腈（济南泉鑫仪器有限公司）、乙酸铵 （天津市彪仕奇科技发展有限公司）、甲醇（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、磷酸（湖北杜克化学科技有限公司）、三乙胺（湖北杜克化学科技有限公司）、磷酸二氢铵（济南泉鑫仪器有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-0.083moloL-1醋酸铵（50：28：22）（醋酸调节pH6.8）为流动相；检测波长为215nm。理论板数按罗红霉素峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取罗红霉素颗粒剂，研细，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取30分钟，放冷，过滤，滤液转移至50毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取罗红霉素对照品约10mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含2mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取罗红霉素颗粒剂辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在罗红霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，罗红霉素对照品在0.2～12.8mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取罗红霉素对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.83%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批罗红霉素颗粒剂样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，6小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品罗红霉素峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明罗红霉素至少在6小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的罗红霉素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.6%，RSD为0.68%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定罗红霉素颗粒剂三批样品中罗红霉素的含量，含量标示量的99.3%、100.2%、99.1%。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-0.083moloL-1醋酸铵（50：28：22）（醋酸调节pH6.8），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为6.0），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），0.045mol.L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈（2∶1）（用三乙胺调pH值至6.5），0.01moloL-1乙酸铵溶液（pH5.1）-甲醇（40：60），0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.6）-乙腈（70：30），乙腈-甲醇-0.083moloL-1醋酸铵（52：30：18）（醋酸调节pH6.8），乙腈-甲醇-水（10：5：85）（用磷酸调PH值为6.0），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），0.1mol.L-1磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.5）-乙腈（75∶25）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-
0.083moloL-1醋酸铵（50：28：22）（醋酸调节pH6.8）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-0.083moloL-1醋酸铵（50：28：22）（醋酸调节pH6.8）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于罗红霉素颗粒剂中罗红霉素的含量测定。罗红霉素颗粒剂中罗红霉素的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]阚家义，屈建.HPLC法同时测定复方罗红霉素片中盐酸氨溴索与罗红霉素的含量[J].中国新药杂志，2009（2）.
[2]陈红丽，孙莉，谢华，叶玉虹.高效液相色谱法测定罗红霉素片中罗红霉素的含量[J].时珍国医国药，2006（4）.
[3]张菁，郁继诚，曹忆堇，郭蓓宁，张婴元.国产罗红霉素胶囊的药代动力学及相对生物利用度[J].中国新药杂志，1997（6）.
[4]吴振洁，李敏伶，叶飞云.改变检测波长高效液相色谱法测定罗红霉素片的含量[J].中国抗生素杂志，1997（3）.
[5]任秀华，申玲玲，向道春，刘宇，陈倩，张冬林，方淑贤，刘东，杜光.复方罗红霉素片多剂量给药在健康志愿者体内的药动学[J].医药导报，2011
（8）.
关键词：罗红霉素颗粒剂；罗红霉素；含量
罗红霉素化学名为9-[O-[（2-甲氧基乙氧基）-甲基]肟]红霉素，为半合成的14元环大环内酯类抗生素。罗红霉素适用于化脓性链球菌引起的咽炎及扁桃体炎，敏感菌所致的鼻窦炎、中耳炎、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作；敏感细菌引起的皮肤软组织感染；沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎。本文采用高校液相测定了罗红霉素颗粒剂中罗红霉素的含量。
1 仪器与试药
Kertone lab day 20实验室纯水机（科尔顿（中国）有限公司）；EasyGuard保护柱（岛津技迩上海商贸有限公司）；SPECORD250 PLUS紫外可见分光光度计（德国耶拿分析仪器股份公司）；ULABO 实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；QUINTIX224电子天平（锡楼兰仪器系统有限公司）；VERTEX VI500高效液相色谱仪（上海禾工科学仪器有限公司）；HH-4A数显电子恒温搅拌水浴锅（江苏省金坛市宏华仪器厂）；PH510台式精密酸度计（安莱立思仪器科技（上海）有限公司）；SK3300HP功率可调台式超声波清洗器（上海垒固仪器有限公司）。罗红霉素对照品由中国药品生物制品检定所提供。醋酸铵（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、醋酸（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、乙腈（济南泉鑫仪器有限公司）、乙酸铵 （天津市彪仕奇科技发展有限公司）、甲醇（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、磷酸（湖北杜克化学科技有限公司）、三乙胺（湖北杜克化学科技有限公司）、磷酸二氢铵（济南泉鑫仪器有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-0.083moloL-1醋酸铵（50：28：22）（醋酸调节pH6.8）为流动相；检测波长为215nm。理论板数按罗红霉素峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取罗红霉素颗粒剂，研细，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取30分钟，放冷，过滤，滤液转移至50毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取罗红霉素对照品约10mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含2mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取罗红霉素颗粒剂辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在罗红霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，罗红霉素对照品在0.2～12.8mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取罗红霉素对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.83%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批罗红霉素颗粒剂样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，6小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品罗红霉素峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明罗红霉素至少在6小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的罗红霉素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.6%，RSD为0.68%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定罗红霉素颗粒剂三批样品中罗红霉素的含量，含量标示量的99.3%、100.2%、99.1%。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-0.083moloL-1醋酸铵（50：28：22）（醋酸调节pH6.8），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为6.0），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），0.045mol.L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈（2∶1）（用三乙胺调pH值至6.5），0.01moloL-1乙酸铵溶液（pH5.1）-甲醇（40：60），0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.6）-乙腈（70：30），乙腈-甲醇-0.083moloL-1醋酸铵（52：30：18）（醋酸调节pH6.8），乙腈-甲醇-水（10：5：85）（用磷酸调PH值为6.0），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），0.1mol.L-1磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.5）-乙腈（75∶25）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-
0.083moloL-1醋酸铵（50：28：22）（醋酸调节pH6.8）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-0.083moloL-1醋酸铵（50：28：22）（醋酸调节pH6.8）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于罗红霉素颗粒剂中罗红霉素的含量测定。罗红霉素颗粒剂中罗红霉素的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]阚家义，屈建.HPLC法同时测定复方罗红霉素片中盐酸氨溴索与罗红霉素的含量[J].中国新药杂志，2009（2）.
[2]陈红丽，孙莉，谢华，叶玉虹.高效液相色谱法测定罗红霉素片中罗红霉素的含量[J].时珍国医国药，2006（4）.
[3]张菁，郁继诚，曹忆堇，郭蓓宁，张婴元.国产罗红霉素胶囊的药代动力学及相对生物利用度[J].中国新药杂志，1997（6）.
[4]吴振洁，李敏伶，叶飞云.改变检测波长高效液相色谱法测定罗红霉素片的含量[J].中国抗生素杂志，1997（3）.
[5]任秀华，申玲玲，向道春，刘宇，陈倩，张冬林，方淑贤，刘东，杜光.复方罗红霉素片多剂量给药在健康志愿者体内的药动学[J].医药导报，2011
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