【摘 要】
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脱酰胺是蛋白多肽类药物中最为常见的降解杂质来源之一.蛋白序列中谷氨酰胺和天冬酰胺经脱酰胺降解后会导致蛋白化学与生物学性质的改变.质谱分析技术可用于定量蛋白及多肽中的脱酰胺杂质,然而传统的基于胰蛋白酶的bottom-up策略,酶切过程中易人为引入脱酰胺,往往导致脱酰胺杂质的测定结果偏高.本研究通过对GIu-C酶酶解条件的优化,获得了在酸性条件下的最佳酶解条件,显著降低了酶切过程造成的人为引入脱酰胺的现象,鉴定了科博肽样品中的脱酰胺位点(N48).并进一步通过方法学考察与不同方法的测定结果对比,验证了方法的专
【机 构】
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中国食品药品检定研究院,北京100050;国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室,北京102629
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脱酰胺是蛋白多肽类药物中最为常见的降解杂质来源之一.蛋白序列中谷氨酰胺和天冬酰胺经脱酰胺降解后会导致蛋白化学与生物学性质的改变.质谱分析技术可用于定量蛋白及多肽中的脱酰胺杂质,然而传统的基于胰蛋白酶的bottom-up策略,酶切过程中易人为引入脱酰胺,往往导致脱酰胺杂质的测定结果偏高.本研究通过对GIu-C酶酶解条件的优化,获得了在酸性条件下的最佳酶解条件,显著降低了酶切过程造成的人为引入脱酰胺的现象,鉴定了科博肽样品中的脱酰胺位点(N48).并进一步通过方法学考察与不同方法的测定结果对比,验证了方法的专属性、重复性与准确性.本研究所建方法为科博肽及其相似蛋白多肽类生化药品中脱酰胺杂质的精准测定奠定了坚实的基础.
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