目的 探讨E2F-1基因沉默后对人胃癌顺铂(DDP)耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药性的影响及可能的作用机制.方法 将人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP接种于6孔板,并分为以E2F-1基因沉默重组慢病毒颗粒Lv-shRNA-E2F-1感染的SGC7901/DDP细胞(实验组)、以对照慢病毒颗粒Lv-shRNA-NC感染的SGC7901/DDP细胞(阴性对照组)以及常规培养的SGC7901/DDP细胞(空白对照组).采用Western blot技术检测各组细胞中E2F-1蛋白的表达,采用四甲基偶氮唑蓝法检测阿霉素、氟尿嘧啶和DDP对各组细胞的半数抑制浓度(IC50),采用流式细胞术检测各组细胞中阿霉素的泵出率和细胞凋亡率,采用半定量RT-PCR和Western blot技术检测各组细胞中多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)及凋亡相关基因cyclin D1、c-Myc、Skp2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 实验组、阴性对照组和空白对照组SGC7901/DDP细胞中E2F-1蛋白的相对表达量分别为0.794±0.033、1.487±0.082和1.511 ±0.084,实验组SGC7901/DDP细胞中E2F-1蛋白的相对表达量较阴性对照组和空白对照组分别下降46.6％和47.5％ (P ＜0.01).阿霉素、氟尿嘧啶和DDP对实验组SGC7901/DDP细胞的IC50均较阴性对照组和空白对照组明显降低(均P＜0.01).实验组、阴性对照组和空白对照组SGC7901/DDP细胞中阿霉素的泵出率分别为(0.16±0.01)％、(0.37±0.01)％和(0.35±0.02)％,实验组SGC7901/DDP细胞中阿霉素的泵出率明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01).实验组、阴性对照组和空白对照组SGC7901/DDP细胞的凋亡率分别为(33.82±1.26)％、(17.34±0.81)％和(13.16±1.06)％,实验组SGC7901/DDP细胞的凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01).与阴性对照组和空白对照组比较,实验组SGC7901/DDP细胞中MDR1、MRP、cyclin D1、c-Myc和Skp2 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(均P＜0.01).结论 沉默E2F-1基因的表达可有效提高人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP对化疗药物的敏感性,并可直接或间接下调经典多药耐药相关基因MDR1和MRP的表达,从而逆转胃癌细胞的多药耐药性,其机制可能与cyclin D1、c-Myc和Skp2的表达下调有关.
E2F-1基因沉默对人胃癌耐药细胞株SGC7901/顺铂多药耐药性的逆转
【摘 要】
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目的 探讨E2F-1基因沉默后对人胃癌顺铂(DDP)耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药性的影响及可能的作用机制.方法 将人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP接种于6孔板,并分为以E2F-1基因沉默重组慢病毒颗粒Lv-shRNA-E2F-1感染的SGC7901/DDP细胞(实验组)、以对照慢病毒颗粒Lv-shRNA-NC感染的SGC7901/DDP细胞(阴性对照组)以及常规培养的SGC790
【机 构】
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(530021南宁,广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科),(530021南宁,广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科),(530021南宁,广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科),(530021南宁,
【出 处】
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中华肿瘤杂志
【发表日期】
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2014年36期
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