【摘 要】
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目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7湖北株(HB)基因真核表达质粒,探讨其在哺乳动物体外、体内表达状况,为本地区HPV相关肿瘤的基因治疗提供依据.方法采用分子克隆技术,构建HP
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目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7湖北株(HB)基因真核表达质粒,探讨其在哺乳动物体外、体内表达状况,为本地区HPV相关肿瘤的基因治疗提供依据.方法采用分子克隆技术,构建HPV16E7-HB(已作测序)重组表达质粒;磷酸钙-DNA沉淀技术及基因免疫技术将外源目的基因(HPV16E7-HB)导入NIH3T3细胞及大、小鼠体内;PCR,RT-PCR,免疫荧光染色技术对外源目的的基因及其产物(Mrna,蛋白质)进行检测;ELISA法用于检测免疫动物抗血清.结果重组后外源目的基因及载体DNA大小、方向、插入位点均正确;转染细胞2d后RT-PCR出现特异扩增带;细胞涂片可见特异性E7蛋白荧光颗粒分布于胞质中,少数在胞核;基因免疫后肌组织E7-HBDNA持续阴暗性;RT-PCR阳性率大鼠3/3、小鼠1/10;虽然组织切片未能栓出E7蛋白,但基因免疫后第2周小鼠血清栓出了特异性抗E7抗体.结论HPV16E7-HB真核表达质料构建成功,并能够在哺乳动物体外、体内有效表达;基因免疫仅需少量抗原即可诱导机体产生较强的免疫应答.
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