【摘 要】
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将虹鳟两种肿瘤坏死因子TNFα1和TNFα2基因的成熟肽编码区域,用带有BamHI和HindIII酶切位点的基因特异性引物进行PCR扩增.扩增片段用限制性内切酶消化并连接到pQE30表达载体
【机 构】
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中国科学院海洋研究所,青岛,266071天津农学院,300384;中国科学院海洋研究所,青岛,266071;Department of Zoology, University of Aberdeen,
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将虹鳟两种肿瘤坏死因子TNFα1和TNFα2基因的成熟肽编码区域,用带有BamHI和HindIII酶切位点的基因特异性引物进行PCR扩增.扩增片段用限制性内切酶消化并连接到pQE30表达载体上,连接产物转化到大肠杆菌JM109感受态细菌中.转化子经PCR筛选,质粒测序,完成了虹鳟两种TNFα基因重组子的构建.重组子经体外培养和诱导后,获得了高效表达的TNFα重组蛋白.高效表达的重组TNFα不受诱导剂IPTG的影响,并且由于重组子高效表达而形成了包涵体;重组蛋白产量约占菌体蛋白总量的25%-30%.应用Ni-NTA和固定金属亲和层析(IMPC)技术,在变性条件下获得了高度纯化的重组蛋白,纯化重组蛋白的产量约为0.5-1mg/L.
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